соискатель кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии
аспирант кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии
д.м.н., доцент кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии
д.м.н., зав. лабораторией механизмов регуляции иммунитета
Aim. To investigate morphological, functional and immunophenotypic features of the immune response using mucosal and parenteral methods of administration of the complex of opportunistic microorganism antigens. Materials and methods. Functional, morphological and immunophenotypic characteristics of immunocompetent cells and organs of mice (80, SWA line) in intact animals (control), as well as the above characteristics in intranasal (3-fold in the dose of 500 ug / mouse), peroral (3-fold in the dose of 2 mg / mouse) and subcutaneous (2-fold in the dose of 200 mg / mouse), methods of administration of multicomponent vaccine Immunovac VP-4 containing the complex of opportunistic microorganism antigens were investigated. Mononuclear leukocytes of spleen, lymph nodes and lymphoid tissue of the small intestine were used to evaluate the expression level of markers (CD3, NK 1.1, CD3/NK, CD4, CD25, CD4/CD25, CD8, CD19, MHC II, CD5.2 (B1), TCR (Tγδ) with the help of monoclonal antibodies («Caltag Laboratories», USA) by means of a flow cytometer FacsCalibur («Beckman Coulter F-500", USA). Cytotoxic activity of natural killers against neoplastic K562 line in MTT assay was revealed. Morphological studies were performed on serial paraffin sections stained with histological and histochemical methods. Statistical processing of the data was performed using statistical package StatSoft 8.0. Results. It was revealed that the investigated complex of opportunistic bacteria antigens causes significant activation of effectors of innate immunity both in parenteral and mucosal immunization. It is displayed in increased levels of expression of differentiation, co-stimulating, adhesive molecules on the surface of mononuclear leukocytes, in proliferation of key effectors of mucosal immunity (Tγδ-B 1 and B- lymphocytes, NK cells), increase in their functional activity, changes in the pattern, cellular composition of immunocompetent organs and lymphoid tissue, regional to the site of administration and distant from it that indicates formation of not only local, but systemic immunity as well. Conclusion. The obtained data allow us to extend the strategy for using vaccines and immunomodulators of bacterial origin by means of non-parenteral immunization methods to create protection from a broad spectrum of pathogens.
Цель. Исследование морфологических, иммунофенотипических и функциональных особенностей формирования иммунного ответа при мукозальных и парантеральных методах введения комплекса антигенов условно-патогенных микроорганизмов. Материалы и методы. Исследованы функциональные, иммунофенотипические и морфологические характеристики иммунокомпетентных клеток и органов (80 мышей, линия СВА) у интактных животных (контроль), а также при интраназальном (3-кратно в дозе 500 мкг/мышь), пероральном (3-кратно в дозе 2 мг/мышь) и подкожном (2-кратно в дозе 200 мкг/мышь) способах введения поликомпонентной вакцины «Иммуновак-ВП-4», содержащей комплекс антигенов условно-патогенных микроорганизмов. На мононуклеарных лейкоцитах селезёнок, лимфатических узлов и лимфоидной ткани тонкой кишки оценивали уровень экспрессии маркёров (СD3, NK 1.1, СD3/NK, CD4, CD25, CD4/CD25, CD8, CD19, MHC II, СD5.2 (В 1), TCR (Tγδ)) при помощи моноклональных антител (CaltagLaboratories, США) на проточном цитометре FacsCalibur (BeckmanCoulterF-500, США). Выявляли цитотоксическую активность натуральных киллеров по отношению к опухолевой линии К562 в МТТ-тесте. Морфологические исследования проводили на серийных парафиновых срезах, окрашенных гистологическими и гистохимическими методами. При статистической обработке данных использовали пакет статистического анализа StatSoft 8.0. Результаты. Выявлено, что исследуемый комплекс антигенов условно-патогенных бактерий вызывает заметную активацию эффекторов врождённого иммунитета как при парентеральной, так и при мукозальной иммунизации. Это проявляется в увеличении уровня экспрессии дифференцировочных, костимулирующих, адгезивных молекул на поверхности мононуклеарных лейкоцитов, в пролифера-ции ключевых эффекторов мукозального иммунитета (Tγδи В 1-лимфоцитов, NK-клеток), повышении их функциональной активности, в изменениях структуры, клеточного состава иммунокомпетентных органов и лимфоидной ткани, региональных к месту введения и удалённых от него, что свидетельствует о формировании не только местного, но и системного иммунитета. Выводы. Полученные данные позволяют расширить стратегию использования вакцин и иммуно-модулирующих препаратов бактериального происхождения с применением непарентеральных методов иммунизации для создания защиты от широкого спектра патогенов.