Отправить статью по E-mail Изучение влияния концентрации в крови 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноата тиазолинаммония на антикоагулянтный эффект при подкожном введении
- Авторы: Старкова А.В.1, Карпенко Ю.Н.1, Сыропятов Б.Я.1, Собин Ф.В.1, Пулина Н.А.1
-
Учреждения:
- Пермская государственная фармацевтическая академия
- Выпуск: Том 35, № 1 (2018)
- Страницы: 88-94
- Раздел: Статьи
- URL: https://permmedjournal.ru/PMJ/article/view/8675
- DOI: https://doi.org/10.17816/pmj35188-94
- ID: 8675
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Изучение влияния содержания в крови 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноата тиазолинаммония на проявление антикоагулянтого эффекта при подкожном введении кроликам.
Материалы и методы. Исследования проведены на беспородных кроликах, которым подкожно вводили вещество в дозе 35 мг/кг. Время свертывания крови определяли с помощью коагулометра «Минилаб 701», а концентрацию соединения в крови – с помощью жидкостного микроколоночного хроматографа «Милихром А-02».
Результаты. Максимальная концентрация соединения в крови и максимальный антикоагулянтный эффект достигаются через 30 мин после подкожного введения. Вещество оказывает антикоагулянтный эффект в течение 120 мин после введения. На данный момент концентрация соединения в крови соответствует 519,8 ± 145,41 нг/мл.
Выводы. Исследуемое соединение при подкожном введении быстро всасывается и начинает оказывать антикоагулянтный эффект. Эффективность его действия зависит от концентрации в крови.
Полный текст
ВВЕДЕНИЕ
В развитых странах тромбозы и тромбоэмболические осложнения являются основной причиной заболеваемости и смертности населения. Риск возникновения этих осложнений высок у пациентов как терапевтического, так и хирургического профилей [3–6, 12, 19]. Для профилактики и лечения тромбозов и тромбоэмболий широко используются прямые антикоагулянты.
В настоящее время в качестве антикоагулянтов применяются непрямые и прямые ингибиторы тромбина, а также прямые ингибиторы фактора Xа.
К непрямым ингибиторам тромбина относят: нефракционированный гепарин, низкомолекулярные гепарины и синтетические пентасахариды (фондапаринукс). Прямым ингибитором тромбина является дабигатрана этексилат, фактора Xа – ривароксабан и апиксабан [8, 12, 17, 25].
Все они обладают побочными эффектами, которые ограничивают их применение.
Основными осложнениями при использовании нефракционированного гепарина являются кровотечения, тромбоцитопения и остеопороз. Опасность кровотечения коррелирует с дозой гепарина, с применением дезагрегантной терапии и с тяжелым состоянием пациента [8, 25]. При введении препарата более 3 дней возможно развитие иммунной тромбоцитопении вследствие образования антител к комплексу гепарин + фактор 4 тромбоцитов [8, 25].
Побочные действия низкомолекулярных гепаринов такие же, как и у нефракционированного гепарина, но выражены они в меньшей степени. В несколько раз реже возникают тромбоцитопения, остеопороз, меньше риск появления кровотечений. Так же, как и нефракционированный гепарин, низкомолекулярные гепарины выводятся почками и могут накапливаться в крови у больных с почечной недостаточностью. Но поскольку низкомолекулярные гепарины в меньшей степени связываются плазменными белками, эндотелием и тромбоцитами и единственный способ их выведения – это почки, то у больных с тяжелой почечной недостаточностью их применение даже более опасно, чем нефракционированного гепарина [1, 7, 8, 20].
При использовании фондапаринукса сообщалось о возникновении гематом, сыпи или зуда в местах подкожных инъекций, обратимом бессимптомном увеличении уровня аминотрансфераз в сыворотке крови, тромбоцитопении, возникновении головной боли, озноба, гипертермии, тошноты, запора, бессонницы, аллергических реакций [8, 18, 25].
При применении дабигатрана возможны кровотечения любой локализации, анемия, тромбоцитопения, нарушения функций печени. Противопоказаниями к его применению являются: почечная недостаточность тяжелой степени; нарушения функций печени [10, 13–15, 22].
При лечении ривароксабаном были выявлены следующие побочные действия: кровотечения различной локализации, анемия, тромбоцитоз, тахикардия, гипотензия, тошнота, нарушения стула, боль в животе, сухость во рту, рвота, повышение активности ряда ферментов, нарушения функций печени, головокружение, головная боль, обмороки, почечная недостаточность, зуд, сыпь, боль в конечностях, лихорадка, отеки, ухудшение общего самочувствия. Противопоказаниями к его назначению являются: кровотечения, заболевания печени, беременность, период лактации, детский и подростковый возраст, почечная недостаточность тяжелой степени, непереносимость лактозы или галактозы [9, 11, 16, 23].
Противопоказаниями к применению апиксабана являются: кровотечения, заболевание печени, нарушение функций почек, возраст до 18 лет, беременность, грудное вскармливание. Применение апиксабана может вызвать: анемию, тромбоцитопению, артериальную гипотензию, кровотечения различной локализации, тошноту, нарушения функций печени [2, 8, 16].
Актуальность проблемы поиска новых прямых антикоагулянтов для практического здравоохранения определила необходимость углубленных исследований веществ, обладающих антикоагулянтной активностью для дальнейшего их внедрения.
В результате скрининговых исследований веществ, синтезируемых в Пермской государственной фармацевтической академии, было выявлено соединение, которое по результатам предыдущих исследований in vitro и in vivo замедляет процесс свертывания крови – 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноат тиазолинаммония [26, 27].
Данное вещество, полученное в лабораторных условиях, представляет собой белый мелкокристаллический порошок без запаха, растворимый в воде, спирте этиловом, диоксане, труднорастворимый в хлороформе.
Цель работы – изучение влияния содержания в крови 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноата тиазолинаммония на выраженность антикоагулянтного эффекта при подкожном введении кроликам.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования in vivo проведены на беспородных кроликах массой 2–5 кг. Животные содержались при стандартном пищевом режиме в условиях вивария в соответствии с СанПиН № 1045-73 и требованиями Фармкомитета РФ к проведению доклинических испытаний, изложенных в «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» [21], а также с соблюдением международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997 г.).
Для изучения антикоагулянтного эффекта вещество вводили подкожно в дозе 35 мг/кг (1/40 ЛД50), которое составило при подкожном введении 1290 (1100–1500) мг/кг. Доза была выбрана с учетом объема циркулирующей крови кролика. Данная доза вещества соответствует концентрации соединения 1 мг/мл крови кролика [28].
Забор крови производили 5 раз – до введения соединения и через 30, 60, 90 и 120 мин после него. Из краевой вены уха отбирали 2 мл крови, стабилизировали 0,2 мл 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия.
Изучение времени свертывания крови проводилось с помощью коагулометра «Минилаб 701». В кювету помещали 100 мкл крови и добавляли 100 мкл изотонического раствора хлорида натрия. Пробы инкубировали в течение 60 с, затем добавляли 100 мкл 1%-ного раствора хлорида кальция и приступали к измерению времени свертывания крови.
Для определения концентрации исследуемого соединения в крови вещество вводилось подкожно в дозе 35 мг/кг. Забор крови производился из краевой вены уха. Отбирали 2 мл крови, стабилизировали 0,2 мл 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия. Забор крови производился 9 раз – до введения и через 30, 60, 90, 120, 180, 360 мин, 24 и 48 ч после введения соединения.
Определение концентрации 4-хлор фенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноата тиазолинаммония в плазме крови производили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на микроколоночном хроматографе «Милихром А-02» (ЗАО «Эконова») в течение 30–60 мин после забора крови.
Хроматографическое исследование осу ществляли на колонке Pronto SIL 120-3-C18 AQ в режиме градиентного элюирования с использованием подвижной фазы на основе ацетонитрила и перхлоратного буфера. Длина волны детектирования исследуемого вещества – 320 нм.
Пробоподготовка биологической жидкости проводилась следующим образом: цельную кровь (2 мл) центрифугировали в пробирках Эппендорфа при 3000 об/мин в течение 5 мин. Плазму отбирали в количестве 0,5 мл и переносили в пробирку Эппендорфа, добавляли 100 мкл кислоты хлористоводородной и 1,5 мл эфира диэтилового. Содержимое пробирки встряхивали на пробирочном вортексе в течение 10 мин и центрифугировали при 5000 об/мин 5 мин; 1 мл экстракта помещали в виалу хроматографическую и испаряли органический растворитель в токе теплого воздуха. Сухой остаток растворяли в 200 мкл метанола и исследовали методом ВЭЖХ.
Результаты исследования обработаны с помощью вариационной статистики методом Фишера – Стьюдента [24].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Как видно из табл. 1, при подкожном введении вещество быстро всасывается, так как максимальное снижение свертываемости отмечается уже через 30 мин после введения. Замедление свертывания крови на 30-й мин составило 102,9 % от исходного времени свертывания. Активность сохранялась около 2 ч.
При исследовании концентрации соединения в крови после подкожного введения видно (табл. 2), что вещество достаточно быстро всасывается. Максимальной концентрация стала через 30 мин после введения и составила 1610,2 ± 194,48 нг/мл. Затем она начала постепенно снижаться. Через 60 мин после введения она составила 1189,8 ± 278,03 нг/мл, через 90 мин – 721,4 ± 220,73 нг/мл, через 120 мин – 519,8 ± 145,41 нг/мл. К 180 мин исследования концентрация значительно снизилась до 273,2 ± 74,52 нг/мл. Через сутки после введения в крови обнаруживается остаточное содержание вещества – 51,0 ± 22,49 нг/мл. Через 48 ч после введения вещество в крови не обнаруживается.
Таблица 1. Влияние 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноата тиазолинаммония на свертывание крови при подкожном введении в дозе 35 мг/кг
Интервал | Время свертывания, с | Изменение свертываемости, % | Количество исследований | р |
Исходная свертываемость | 128,4 ± 3,92 |
| 8 |
|
30 мин | 260,6 ± 17,76 | –102,9 | 8 | < 0,001 |
60 мин | 241,7 ± 9,81 | –88,2 | 8 | < 0,001 |
90 мин | 228,1 ± 14,00 | –77,6 | 8 | < 0,001 |
120 мин | 158,9 ± 10,22 | –23,7 | 8 | < 0,05 |
Примечание: р – в сравнении с исходной свертываемостью.
Таблица 2. Исследование концентрации 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноат тиазолинаммония в крови при подкожном введении в дозе 35 мг/кг
Интервал | Концентрация, нг/мл | Количество исследований |
Исходная концентрация | 0 | 5 |
30 мин | 1610,2 ± 194,48 | 5 |
60 мин | 1189,8 ± 278,03 | 5 |
90 мин | 721,4 ± 220,73 | 5 |
120 мин | 519,8 ± 145,41 | 5 |
180 мин | 273,2 ± 74,52 | 5 |
360 мин | 115,0 ± 72,07 | 5 |
24 ч | 51,0 ± 22,49 | 5 |
48 ч | 0 | 5 |
Полученные результаты свидетельствуют о том, что 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноат тиазолинаммония быстро всасывается при подкожном введении. Максимальная концентрация соединения в крови (1610,2 ± 194,48 нг/мл) достигается через 30 мин после подкожного введения. Максимальный антикоагулянтный эффект также соответствует 30 мин исследования – свертываемость крови замедляется на 102,9 %. Затем антикоагулянтная активность начинает снижаться, через 60 мин замедление свертывания составило –88,2 %. Снижается и концентрация соединения в крови, через 60 мин после введения равна 1189,8 ± 278,03 нг/мл. Через 90 мин замедление свертывания крови составило –77,6% от исходного, при этом концентрация соединения в крови снизилась до 721,4 ± 220,73 нг/мл. Вещество оказывает антикоагулянтный эффект в течение 120 мин после введения, замедление свертывания крови при этом составило 23,7 % от исходного уровня. На данный момент концентрация соединения в крови соответствует 519,8 ± 145,41 нг/мл. Снижение концентрации соединения до более низкого значения приводит к прекращению действия вещества.
ВЫВОДЫ
- Исследуемое соединение при подкожном введении быстро всасывается и начинает оказывать антикоагулянтный эффект.
- Максимальная концентрация вещества в крови и максимальный антикоагулянтный эффект отмечены на 30-й минуте после введения.
- Эффективность действия соединения зависит от его концентрации в крови.
- Снижение концентрации 4-хлорфе нил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноата тиазолин аммония в крови ниже 519,8 ± 145,41 нг/мл приводит к прекращению оказываемого действия.
Об авторах
Алла Валентиновна Старкова
Пермская государственная фармацевтическая академия
Автор, ответственный за переписку.
Email: allaperm@list.ru
кандидат медицинских наук, доцент кафедры физиологии
Россия, 614990, г. Пермь.ул. Полевая, д.2Юлия Николаевна Карпенко
Пермская государственная фармацевтическая академия
Email: allaperm@list.ru
кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры токсикологической химии
Россия, 614990, г. Пермь.ул. Полевая, д.2Борис Яковлевич Сыропятов
Пермская государственная фармацевтическая академия
Email: allaperm@list.ru
доктор медицинских наук, профессор кафедры физиологии
Россия, 614990, г. Пермь.ул. Полевая, д.2Федор Владимирович Собин
Пермская государственная фармацевтическая академия
Email: allaperm@list.ru
кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармацевтической технологии
Россия, 614990, г. Пермь.ул. Полевая, д.2Наталья Алексеевна Пулина
Пермская государственная фармацевтическая академия
Email: allaperm@list.ru
доктор фармацевтических наук, профессор, заведующая кафедрой фармацевтической технологии
Россия, 614990, г. Пермь.ул. Полевая, д.2Список литературы
- Аверков О.В. Низкомолекулярные гепарины в новых рекомендациях по ведению больных острым коронарным синдромом без стойких подъемов сегмента ST на ЭКГ. Клиническая фармакология и терапия 2008; 17 (1): 36–40.
- Апиксабан: инструкция, применение и формула, available at: http://www.rlsnet.ru/ mnn_index_id 6095.htm
- Баркаган З.С. Очерки антитромботической фармакопрофилактики и терапии. М.: Ньюдиамед 2000; 148.
- Баркаган З.С. Современная антитромботическая профилактика и терапия. Фармакотерапия заболеваний сердечно-сосудистой системы: лекции для практических врачей. VIII национальный конгресс «Человек и лекарство». М. 2002; 142–153.
- Баркаган З.С., Сердюк Г.В. Невынашивание беременности и мертворождаемость при нарушениях в системе гемостаза. Гематология и трансфузиология 1991; 4: 3–5.
- Бокарев И.Н., Попова Л.В. Венозный тромбоэмболизм и тромбоэмболия легочной артерии. Медицинское информационное агентство 2005; 208.
- Бокарев И.Н., Попова Л.В. Опыт применения низкомолекулярных гепаринов при лечении тромбозов глубоких вен. Трудный пациент 2008; 10, available at: http://www/t-pacient.ru/archive/tp10-08/tp10-08 495.html.
- Васильева Е.Ю., Воробьева И.И. Прямые антикоагулянты в кардиологии. Российский медицинский журнал 2010; 18 (22): 1379–1383.
- Верткин А.А. Применение ривароксабана в качестве антитромбической терапии у пациентов с неклапанной фибрилляцией предсердий. Кардиология 2013; 4: 3–4.
- Гиляров М.Ю. Дабигатран: как выбрать оптимальную дозу в реальной клинической практике? Вестник аритмологии 2012; 69: 77–80.
- Гиляров М.Ю. Ривароксабан в профилактике тромбоэмболических осложнений у пациентов с фибрилляцией предсердий. Рациональная фармакотерапия в кардиологии 2012; 8 (3): 453–456.
- Головачева Т.В., Скворцов В.В., Скворцов К.Ю. Применение антикоагулянтов при сердечно-сосудистых заболеваниях. Атеротромбоз 2009; 2: 2–19.
- Дабигатран – новый подход к профилактике тромбоэмболических осложнений. Травматология и ортопедия России 2011; 3 (61): 80–83.
- Дабигатрана этексилат: инструкция, применение, формула, available at: http:// www.rlsnet.ru/mnn_index_id_5498.htm.
- Затейщиков Д.А., Зотова И.В. Дабигатран: переспективы клинического применения. Фарматека 2011; 15: 30–34.
- Канорский С.Г. Предупреждение тромбоэмболий у больных с фибрилляцией предсердий: проблема выбора орального антикоагулянта. Международный медицинский журнал 2012; 3: 24–29.
- Куликов А.Н. Фармакотерапия острых коронарных синдромов. ФАР Миндекс-Практик 2005; 9: 1–16.
- Латфулин И.А., Подольская А.А. Применение антикоагулянтов при остром коронарном синдроме. Актуальные вопросы клинической фармакологии 2009; 3: 71–75.
- Макацария А.Д., Бицадзе В.О. Тромбофилические состояния в акушерской практике. М.: Russo 2001; 480.
- Мелкумян А.Л., Берковский А.Л., Кишинец Р.С., Козлов А.А. Мониторинг эффективности применения прямых антикоагулянтов. Гематология и трансфузиология 2013; 58 (1): 32–38.
- Миронов А.Н., Бунатян Н.Д. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. М.: Гриф и К 2012; 944.
- Моисеев С.В. Когда и как применять дабигатран при фибрилляции предсердий? Рациональная фармакотерапия в кардиологии 2012; 8 (6): 819–825.
- Никонов В.В., Курсов С.В. Механизм действия антикоагулянтов и перспективы клинического применения ривароксабана – первого эффективного ингибитора фактора Ха с возможностью энтерального введения. Медицина неотложных состояний 2011; 34 (3): 52–57.
- Прозоровский В.В. Статистическая обработка результатов фармакологических исследований. Психофармакология и биологическая наркология 2007; 7 (3–4): 2090–2120.
- Пэрадайн Н.А., Шувалова Н.В. Новые пероральные антикоагулянты. Здравоохранение Чувашии 2013; 4, available at: http://giduv.com/2013/4/novyeperoralnye.
- Старкова А.В., Собин В.Ф, Сыропятов Б.Я., Пулина Н.А. Исследование влияния 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноат тиазолинаммония на свертывание крови при внутрижелудочном и подкожном введении. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2014; 7: 53–55.
- Старкова А.В., Собин В.Ф, Сыропятов Б.Я., Пулина Н.А. Сравнительная оценка влияния 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноат тиазолинаммония и гепарина на свертывание крови. Экспериментальная и клиническая фармакология 2013; 76 (10): 25–26.
- Трахтенберг И.М., Сова Р.Е., Шефтель В.О., Оникиенко Ф.А. Показатели нормы у лабораторных животных в токсикологическом эксперименте. М.: Медицина 1978;
Дополнительные файлы
