Морфологическая оценка изменений внутренних органов крыс при введении таргетного препарата «Сутент» в эксперименте

Полный текст

Введение

Одной из проблем современной онкологии является почечноклеточный рак (ПКР), который характеризуется высоким метастатическим потенциалом. 23 764 больных ПКР были выявлены в России в 2017 г., а абсолютное число умерших составило 7063 человека. ПКР мало чувствителен к химиотерапии и лучевой терапии, рецидивирует в 20–40 % случаев после нефрэктомии. Поэтому значительное количество больных ПКР нуждаются в длительной системной терапии [1].

При ПКР происходит гиперэкспрессия генов, кодирующих сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), трансформирующий фактор роста (TGF-α), которые ответственны за неоангиогенез и клеточную пролиферацию. Причиной изменения их экспрессии является потеря активности гена VHL (von Hippel-Lindau) в результате его мутации или метилирования. VHL-комплекс разрушается, в результате этого происходит накопление белка HIF-1, что способствует гиперэкспрессии соответствующих генов. Рост и метастазирование опухоли во многом зависят от эффективного кровоснабжения и доступа кислорода за счет неоангиогенеза, который развивается в результате сложного взаимодействия пролиферирующих эндотелиальных, стромальных клеток и межклеточного матрикса. VEGFR считается одним из наиболее важных факторов, регулирующих данные процессы в опухоли, а избыточная продукция PDGF вызывает стимуляцию перицитов, также способствуя неоангиогенезу [2].

В результате открытия патогенетического пути развития ПКР, связанного с геном VHL, в 2005 г. в России были разрешены к применению таргетные препараты, подавляющие активность VEGF и его рецепторов. Одним из них является лекарственный препарат «Сутент®» – низкомолекулярный ингибитор тирозинкиназ, воздействующий на все известные виды рецепторов к PDGF и VEGF – VEGFRs, PDGFR-α, PDGFR-β, c-KIT и FLT-3, которые регулируют рост опухоли за счет пролиферации опухолевых клеток и ангиогенеза, обеспечивают ее метастазирование. В эксперименте установлено, что ингибиторы тироксинкиназ вызывают дегенерацию и некроз клеток опухоли без значительного изменения ее размеров [3]. На мышах линии С57ВL6J препарат подавлял рост опухоли за счет нарушения ее васкуляризации, приводил к снижению частоты метастазирования на 83 % на модели карциномы легких Льюиса. В других экспериментах была показана высокая противоопухолевая активность при лечении меланомы, рака толстой кишки и легкого. Применение «Сутента» для лечения больных ПКР в первой линии терапии увеличило общую и безрецидивную выживаемость [4; 5].

Для лечения ПКР «Сутент» принимается в дозе 50 мг/сут в течение 4 недель с двухнедельным перерывом в режиме монотерапии. Необходимость принимать препарат для поддержания терапевтического эффекта в течение длительного времени приводит к развитию выраженных побочных реакций. Наиболее частыми побочными эффектами оказались астения, диарея, кожная сыпь, уменьшение фракции выброса левого желудочка, артериальная гипертония, а также тромбоцитопения, нейтропения и гипотиреоз. В ряде публикаций представлены сведения о клиническом течении и лечении осложнений, развивающихся на фоне монотерапии «Сутентом» у онкобольных [6; 7]. Однако до сих пор не изучены морфологические изменения внутренних органов при применении «Сутента» в качестве монотерапии ПКР.

Цель исследования – установить изменения гистологического строения внутренних органов и гематологических показателей крови у лабораторных крыс в эксперименте при внутрижелудочном введении таргетного препарата «Сутент®» в дозах 7 и 35 мг/кг.

Материалы и методы исследования

Эксперименты проведены на белых беспородных крысах обоего пола массой в среднем 200–250 г. Животных содержали в виварии при температуре воздуха 20–22 °С, естественном освещении при свободном доступе к пище и воде. Все работы с лабораторными животными выполнены в соответствии с этическим принципам, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в других научных целях (Страсбург, 18 марта 1986 г.). Исследование было одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО ПГМУ им. академика Е.А. Вагнера МЗ РФ, протокол № 5 от 24.06.2020. Лабораторные животные были распределены на группы № 1 и 4 – получали цитотоксический препарат «Сутент®» в дозе 7 мг/кг веса; № 2 и 5 – получали препарат в дозе 35 мг/кг веса; № 3 и 6 – контрольные группы. В каждой группе было по 8 животных (4 самца и 4 самки). Всего в эксперименте участвовало 48 животных. Ежедневно один раз в сутки в течение 30 дней опытным группам вводили внутрижелудочно препарат «Сутент®» в виде водной суспензии в воде очищенной в объеме, не превышающем 0,5 мл. Согласно действующей инструкции по применению зарегистрированного препарата «Сутент®», в капсулах 50 мг («Пфайзер Инк.», США) максимальная суточная доза препарата составляет 75 мг. С использованием общепринятых коэффициентов пересчета [8] была рассчитана терапевтическая доза для исследуемых животных, которая составила 7 мг/кг. В результате для перорального введения экспериментальным животным были выбраны следующие дозы препарата: 1-я доза – 7 мг/кг (терапевтическая доза); 2-я доза – 35 мг/кг (в 5 раз больше терапевтической дозы). В контрольных группах животные получали воду очищенную в том же режиме дозирования. По окончании срока наблюдения животных выводили из эксперимента путем декапитации под эфирным наркозом. Забой животных групп № 1–3 производили через 30 дней после начала эксперимента; забой животных групп № 4–6 – через две недели после прекращения эксперимента (отставленные группы). Кровь в объеме 1,0 мл забирали на исследование гематологических показателей. С помощью гематологического анализатора Medonik определяли в крови количество эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина, среднее содержание гемоглобина в эритроците, гематокрит. В биохимической лаборатории в крови животных выявляли АЛТ, АСТ, ТТГ, ЩФ, общий белок, креатинин, мочевину, глюкозу. Для микроскопического изучения кусочки сердца, лёгких, печени, селезёнки, почки, надпочечника, щитовидной железы, поджелудочной железы, пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки, яичника и семенника фиксировали в течение 24 ч в 10%-ном забуференном нейтральном растворе формалина. После фиксации материал заливали в парафин по общепринятой схеме, готовили гистологические срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Микроскопирование и фотографирование препаратов проводили с помощью микроскопа «Ломо» «Микмед-6» при увеличении 100, 200, 400 и цифровой фотокамеры ToupCam. Количественные показатели обрабатывали статистически: вычисляли средние показатели (M) и ошибку репрезентативности средней арифметической (m). Для определения достоверного различия дисперсий признаков применялся критерий Фишера (F), при оценке статистической достоверности различий (р) использовали двухвыборочный критерий Стьюдента (t). Статистически значимыми считали различия при уровне значимости р < 0,05. Статистическая обработка данных проводилась на ПК с использованием встроенного пакета анализа табличного процессора Excel® 2016 MSO.

Результаты и их обсуждение

При проведении эксперимента по внутрижелудочному введению препарата «Сутент» произошла гибель 4 животных в группе № 4 (50 % животных), 2 животных в группе № 2 (25 %), 4 животных (50 %) – в группе № 5.

Введение «Сутента» в дозе 7 мг/кг в течение 30 дней в группе № 1 вызвало статистически значимое снижение количества эритроцитов (на 18,8 % у самцов и на 10,9 % у самок) и гемоглобина, по сравнению с показателями контрольной группы (таблица). Количество тромбоцитов не имело статистически достоверных отклонений, однако в группе № 4 произошло увеличение их содержания у самок. При неизменном содержании в крови лейкоцитов отмечалось увеличение абсолютного количества агранулоцитов (лимфоцитов и моноцитов) при резком снижении числа гранулоцитов на 73,6 % у самцов и 66,3 % у самок. Через две недели после отмены препарата наблюдалась нормализация гематологических показателей, за исключением более низкого, чем в норме, количества эритроцитов у самцов, и значительного увеличения числа лейкоцитов за счет резкого возрастания количества гранулоцитов на 49,8 % у самцов и 74,8 % у самок.

 

Показатели периферической крови у экспериментальных крыс (M ± m)

Животное	Контроль	Доза, мг/кг		Контроль отсроченный	Доза, мг/кг
		7	35		7, отсрочено	35, отсрочено
Количество эритроцитов (1012/л) (RBC)
Самцы	8,44 ± 0,08	6,85 ± 0,18*	6,52 ± 0,20*	8,53 ± 0,12	7,86 ± 0,05*	6,35 ± 0,02*
Самки	7,30 ± 0,16	6,50 ± 0,03*	5,65 ± 0,09*	7,11 ± 0,18	7,04 ± 0,12	5,72 ± 0,13*
Количество гемоглобина (г/л) (HGB)
Самцы	146,33 ± 1,31	135,25 ± 2,80	116,75 ± 2,93*	146,67 ± 0,84	147,0 ± 0,89	131,0 ± 1,79*
Самки	138,17 ± 1,97	125,25 ± 0,47*	102,75 ± 2,09*	137,5 ± 2,16	140,5 ± 2,01	130,50 ± 0,22
Среднее содержание гемоглобина в клетке (pg) (MCH) ЦП
Самцы	17,35 ± 0,21	19,88 ± 0,21*	17,95 ± 0,15	17,27 ± 0,28	18,70 ± 0,12*	20,70 ± 0,36
Самки	19,0 ± 0,21	20,33 ± 0,27*	18,05 ± 0,12*	19,45 ± 0,22	20,0 ± 0,04	22,85 ± 0,51
Гематокрит (%) (HCT)
Самцы	42,23 ± 0,48	38,55 ± 0,76*	32,65 ± 0,85*	42,88 ± 0,57	42,6 ± 0,22	39,70 ± 0,63
Самки	39,82 ± 0,55	35,9 ± 0,33*	27,80 ± 0,69*	39,63 ± 0,56	40,20 ± 0,72	40,55 ± 0,92
Тромбоциты (109/л) (PLT)
Самцы	682,0 ± 22,82	585,25 ± 21,25	440,5 ± 23,51*	672,33 ± 24,67	674,0 ± 7,16	1149,0 ± 30,41*
Самки	597,0 ± 70,17	610,5 ± 20,35	328,0 ± 28,7*	663,67 ± 11,53	834,0 ± 6,71*	1246,5 ± 44,1*
Количество лейкоцитов (109/л) (WBC)
Самцы	10,88 ± 0,43	11,55 ± 0,78	4,83 ± 0,36*	10,48 ± 1,35	17,45 ± 1,50	11,30 ± 1,39
Самки	7,08 ± 0,67	6,90 ± 0,78	2,53 ± 0,20*	6,45 ± 0,42	9,25 ± 0,20	12,15 ± 2,44
Агранулоциты (лимфоциты), 109/л (LYM)
Самцы	70,65 ± 2,7	89,5 ± 1,22*	80,75 ± 1,45*	78,25 ± 3,30	73,0 ± 2,68	56,50 ± 6,48*
Самки	69,98 ± 2,55	85,0 ± 0,93*	83,5 ± 1,74*	77,25 ± 3,51	67,5 ± 2,46	50,0 ± 3,13*
Гранулоциты, 109/л (GRAN)
Самцы	22,73 ± 2,72	6,0 ± 0,26*	11,25 ± 0,94*	14,68 ± 3,39	22,0 ± 1,79	36,50 ± 6,93*
Самки	23,73 ± 2,34	8,0 ± 0,93*	11,0 ± 1,86*	16,02 ± 3,17	28,0 ± 1,34	43,0 ± 1,34*

Примечание : * – р < 0,05.

 

Поступление препарата в дозе 35 мг/кг в течение 30 дней (группа № 2) вызвало уменьшение количества эритроцитов на 22,7 % у самцов и 22,6 % самок, снижение содержания гемоглобина, падение числа тромбоцитов на 35,4 % у самцов и 45 % у самок и лейкоцитов на 55,6 % и 64,3 % соответственно. Содержание в крови агранулоцитов было увеличено, а число гранулоцитов снижено на 50,5 у самцов и 53,6 % у самок (см. таблицу). После отмены препарата в группе № 5 количество эритроцитов оставалось сниженным, а содержание гемоглобина имело тенденцию к восстановлению. Число тромбоцитов было резко увеличено на 70,9 % у самцов и 87,8 % у самок, содержание лейкоцитов у самок выросло на 88,3 %, а у самцов соответствовало контролю. Изменилось соотношение гранулоцитов и агранулоцитов: количество агранулоцитов статистически достоверно снизилось, а число гранулоцитов возросло более чем на 100 % у самцов и самок. Такие показатели свидетельствуют об активизации миелопоэза и восстановлении функции красного костного мозга после прекращения действия препарата. Доказательством этого факта явилось появление в крови крыс группы № 2 и 5 полихроматофилов (ретикулоцитов) и палочкоядерных форм гранулоцитов. Более медленно происходило восстановление эритропоэза, так как эритроциты являются долгоживущими клетками.

В результате введения препарата в дозе 35 мг/кг в крови животных группы № 2 установлено статистически значимое повышение уровня АЛТ (до 262,4 Ед/л при норме 70,5 Ед/л), АСТ (до 501,9 Ед/л при норме 122.2 Ед/л), щелочной фосфатазы (до 518,7 Ед/л при норме 361,5 Ед/л) и ГГТ (до 9,4 Ед/л при норме 4,8 Ед/л). Через 2 недели после отмены препарата в группе № 5 показатели АЛТ (93,3 Ед/л), АСТ (182,9 Ед/л) и ГГТ (9,2 Ед/л) имели тенденцию к нормализации, но оставались повышенными. В группе № 1 биохимические показатели соответствовали контрольным данным.

Гематологическая токсичность при приеме «Сутента» выявляется у онкобольных с частотой, по разным данным, от 16 до 80 % [9; 10]. Основными мишенями препарата являются рецепторы VEGF, PDGFR и рецептор стволовых клеток с-KIT. Блокирование рецептора к PDGF напрямую подавляет образование тромбоцитов в красном костном мозге. Рецептор c-KIT участвует в регуляции пролиферации и дифференцировки клеток, в том числе стволовых клеток красного костного мозга, а также в поддержании механизмов апоптоза и клеточной адгезии. Ингибирование с-KIT является причиной развития гранулоцитопении и анемии. Мутация рецептора часто определяется у онкобольных, например, при опухолях пищеварительной системы – в 85–90 % случаев [11; 12].

У всех животных в экспериментальных группах № 1 и 2 во внутренних органах были установлены нарушение кровообращения в виде венозного полнокровия и стазы крови в сосудах микроциркуляторного русла. В капиллярах и венулах наблюдался сладж эритроцитов, плазморрагии, во многих органах был выявлен периваскулярный отек. Изменение состава крови, угнетение гранулоцитарного, эритроцитарного и тромбоцитарного ростков кроветворения в ходе эксперимента, тяжелые нарушения кровообращения привели к развитию кровоизлияний во внутренних органах. Они наблюдались как в группе № 1, так и в группе № 2 в легком, печени, почках, поджелудочной железе, адвентициальных оболочках пищевода и желудка (рис. 1). В печени, проксимальных канальцах почки, ацинусах поджелудочной железы выявлены дистрофические изменения паренхиматозных клеток. Мелкоочаговые некрозы определялись в печени крыс группы № 1 и более крупные – в группе № 2 (рис. 2).

 

Рис. 1. Графики относительного количества (%) животных в каждой группе (группы № 1, 4, 2, 5), в органах которых наблюдались кровоизлияния: а – группы № 1 и 4; б – группы № 2 и 5

 

Рис. 2. Гистологическое строение органов: а - печень, очаги некрозов (группа № 1); б – желудок, кровоизлияние в серозную оболочку (группа № 1); в – почка, кровоизлияние в корковом веществе (группа № 4); г – надпочечник, кровоизлияния в корковом веществе (группа № 2); д – кора головного мозга, дистрофия нейроцитов (группа № 2); е – двенадцатиперстная кишка, воспалительная инфильтрация в подслизистой оболочке (группа № 2). Окраска гематоксилином и эозином. Ув. а, б, в, д, е – х400, г – х200

 

Блокируя активность рецепторов VEGF и связанных с ним сигнальных путей для подавления неоангиогенеза, «Сутент» усиливает апоптоз как опухолевых, так и эндотелиальных клеток, подавляет пролиферативную активность адвентициальных клеток и перицитов кровеносных сосудов, в результате способствует развитию ишемии в органах, что приводит в дистрофии и некрозам паренхиматозных клеток [13–15]. Гепатоцитам свойственна выраженная чувствительностью к ишемии [16]. В ткани печени осуществляется биотрансформация «Сутента» с участием фермента CYP3A4 системы цитохрома Р450, локализующегося в мембране эндоплазматической сети гепатоцитов, а также энтероцитов тонкой кишки. Нарушения кровообращения в печени, приводящие к гипоксии, снижают активность ферментов, способствуя накоплению и токсическому действию препарата [17]. Показателями цитолиза гепатоцитов в группе № 2 явилось увеличение уровня печеночных трансаминаз в крови, их нормализация происходила медленно после отмены препарата и не достигла контрольного уровня. Через две недели после прекращения введения «Сутента» в группах № 4 и 5, несмотря на восстановление гематологических показателей, сохранялись нарушения кровообращения, дистрофические изменения и некрозы паренхиматозных клеток (см. рис. 1).

В миокарде животных группы № 2 на фоне интерстициального отека наблюдалась диссоциация кардиомиоцитов и дистрофические изменения в их цитоплазме. Кардиотоксичность обусловлена способностью «Сутента» повреждать митохондриальный аппарат кардиомиоцитов и вызывать их апоптоз. Она наблюдается у 15 % онкобольных, усугубляется гипертензией и приводит к развитию дисфункции левого желудочка [18]. M.D. Wu et al. считают, что кардиотоксичность «Сутента» вызвана его прокоагулянтной активностью и обусловленными ею нарушениями реологических свойств крови [19].

Нейротоксичность является редким осложнением терапии «Сутентом», несмотря на способность препарата проникать в ткань мозга через гематоэнцефалический барьер [20]. По данным T.E. Hutson et al. [21], неврологические осложнения встречаются с частотой менее 1 %. В наших исследованиях у животных группы № 2 в коре головного мозга наблюдались признаки гидропической дистрофии и гибели нейроцитов: изменение формы клеток, набухание или сморщивание их цитоплазмы, хроматолиз и появление клеток-теней. В этой группе было установлено изменение поведения животных, в частности, отмечено снижение их двигательной активности, вялость, отсутствие интереса к пище. Через две недели после прекращения эксперимента произошла нормализация поведенческих реакций животных и восстановление гистологической картины коры головного мозга.

Обращает на себя внимание изменение гистологического строения органов эндокринной системы и поджелудочной железы в группе № 2 по сравнению с группой № 1. В группе № 1 в надпочечниках части животных были выявлены мелкоочаговые некрозы коркового вещества и снижение липидных включений у части адренокортикоцитов. В группе № 2 у всех животных наблюдалось увеличение размеров надпочечников и массивные кровоизлияния в корковом веществе, мелко- и среднеочаговые некрозы (см. рис. 2). В ткани щитовидной железы у 50 % животных группы № 2 содержались увеличенные в размерах фолликулы с уплощенным эпителием, что согласуется с данными литературы о том, что у 85 % пациентов, получавших «Сутент», отмечается падение концентрации йодсодержащих гормонов и аномальные результаты функциональных тестов щитовидной железы [22; 23]. Гипотиреоз и анемия являются причиной развития частого осложнения терапии «Сутентом» – астении, которая определяется у 11 % больных [24]. В поджелудочной железе в группе № 2 были выявлены массивные стеатонекрозы с формированием четко выраженной демаркационной зоны, состоящей из лейкоцитов. В группе № 5 в поджелудочной железе имелись склеротические изменения долек. Таким образом, введение «Сутента» вызывало полиорганную недостаточность, что явилось причиной гибели 10 животных как в группе № 4, так и в группах № 2 и 5.

В группах № 1 и 2 установлено уменьшение размеров лимфоидных фолликулов и периартериальных муфт в составе белой пульпы селезенки. Герминативные центры (ГЦ) фолликулов имели небольшие размеры, были представлены единичными лимфоцитами, множеством апоптозных телец и макрофагов, что свидетельствует о повышенном распаде лимфоцитов и фагоцитозе апоптозных телец. В красной пульпе селезенки у всех животных отмечалось резкое полнокровие и увеличение количества сидерофагов. В группах № 4 и 5 происходило восстановление структуры ГЦ, однако площадь белой пульпы оставалась меньше контрольного уровня. В расширенных тяжах красной пульпы наблюдалось увеличение размеров очагов миелоидного кроветворения.

Снижение количества лимфоцитов у онкобольных приводит к подавлению клеточного и гуморального иммунитета и вызывает формирование иммунодефицита. Уменьшение содержания лимфоцитов в селезенке, падение числа гранулоцитов в крови, выявленное при введении «Сутента», может способствовать присоединению вторичной инфекции и появлению риска развития инфекционных осложнений, частота которых, по данным литературы, составляет около 80 % [25; 26]. В наших исследованиях у 50 % животных группы № 2 в двенадцатиперстной кишке (ДПК) в собственной пластинке слизистой и подслизистой оболочках была выявлена массивная диффузная инфильтрация гранулоцитами и лимфоцитами, а также расширение просвета части желез и уплощение выстилающего их эпителия. Просветы желез были заполнены лейкоцитами с тенденцией к формированию микроабсцессов (см. рис. 2). У 50 % животных этой группы наблюдался некроз слизистой оболочки ДПК с образованием эрозивных и язвенных дефектов. Через две недели после отмены препарата у животных группы № 5 сохранялась лимфоидная инфильтрация слизистой и подслизистой оболочек. Часть желез в подслизистой были атрофированы. В то же время в слизистой оболочке пищевода и желудка не было выявлено явных признаков раздражающего действия препарата при его внутрижелудочном введении. Блокада рецепторов VEGF и PDGF вызывает не только развитие ишемии в оболочках пищеварительного тракта, что понижает на фоне гипоксии в энтероцитах активность ферментов цитохрома Р450, но и нарушает обновление эпителия, а ингибирование c-KIT тормозит регенерацию как эпителия, так и дифференцировку стволовых клеток, ответственных за восстановление эпителия [27].

Изучение гистологического строения половых органов показало, что как в группе № 1, так и в группе № 2 у всех самцов наблюдался выраженный отек интерстициальной ткани яичка, который в некоторых случаях сопровождался частичной атрофией семенных канальцев. Отек сохранялся и после отмены препарата. У самок строение яичников соответствовало контролю.

Выводы

1. Введение препарата «Сутент» привело к развитию у экспериментальных крыс гипохромной анемии, тромбоцитопении и гранулоцитопении. Отмена препарата вызвала восстановление через две недели гематологических показателей до уровня, выше контрольного, за исключением содержания в крови эритроцитов.
2. Морфологическими критериями токсичности препарата явились нарушения кровообращения, отеки, кровоизлияния, дистрофические изменения и некрозы разной степени выраженности во всех исследуемых органах. Они определялись при обеих дозах введения «Сутента» и сохранялись в течение двух недель после отмены препарата.
3. Введение «Сутента» в дозе 35 мг/кг вызвало более выраженную, по сравнению с дозой 7 мг/кг, гематологическую, гепатологическую, кардиологическую и нейрологическую токсичность, более значительное поражение надпочечников, щитовидной и поджелудочной желез, а также способствовало присоединению вторичной инфекции, проявившейся развитием острого дуоденита с формированием микроабсцессов.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов равноценен.

Об авторах

Наталия Ивановна Гуляева

Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера

Автор, ответственный за переписку.
Email: bizon55@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0572-7594
Scopus Author ID: 598754
https://e.mail.ru/inbox/

кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник ЦНИЛ

Россия, Пермь

Г. П. Вдовина

Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера

Email: bizon55@mail.ru

доктор фармакологических наук, профессор, заведующая кафедрой фармакологии

Россия, Пермь

Г. Г. Фрейнд

Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера

Email: bizon55@mail.ru

доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой патологической анатомии с секционным курсом

Россия, Пермь

А. А. Бурлуцкая

Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера

Email: bizon55@mail.ru

преподаватель кафедры фармакологии

Россия, Пермь

М. П. Чугунова

Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера

Email: bizon55@mail.ru

кандидат фармакологических наук, ведущий научный сотрудник ЦНИЛ

Россия, Пермь

М. О. Карипова

Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера

Email: bizon55@mail.ru

ассистент кафедры микробиологии и вирусологии

Россия, Пермь

Список литературы

Дополнительные файлы