Иммуногенетические параметры у детей с атопическими заболеваниями
- Авторы: Иллек Я.Ю.1, Суетина И.Г.1, Хлебникова Н.В.1, Суслова Е.В.1, Савинова М.В.2, Дудырева Э.В.2, Земцова Е.В.2
-
Учреждения:
- Кировский государственный медицинский университет
- Детский клинический консультативно-диагностический центр
- Выпуск: Том 40, № 1 (2023)
- Страницы: 27-33
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья получена: 16.03.2023
- Статья одобрена: 16.03.2023
- Статья опубликована: 16.03.2023
- URL: https://permmedjournal.ru/PMJ/article/view/321396
- DOI: https://doi.org/10.17816/pmj40127-33
- ID: 321396
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Цель. Определить особенности распределения антигенов главного комплекса гистосовместимости у детей дошкольного и младшего школьного возраста с атопическими заболеваниями.
Материалы и методы. Под наблюдением находились дети со среднетяжёлым течением атопического дерматита, атопического дерматита с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом, самостоятельного персистирующего аллергического ринита, атопической бронхиальной астмы. У больных проводили идентификацию антигенов HLA-комплекса I и II классов.
Результаты. Исследования показали, что у больных атопическим дерматитом констатировалась высокая частота встречаемости HLA B15, DRB1*13 и DQB1*0602-8, у больных атопическим дерматитом с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом – HLA B12, B13 и DQB1*01, у больных самостоятельным персистирующим аллергическим ринитом – HLA A10 и DQB1*201, у больных атопической бронхиальной астмой – HLA B18. П
Выводы. Представительство в тканях указанных антигенов HLA-комплекса ассоциировалось с увеличением риска возникновения атопических заболеваний в 2,3–4,6 раза.
Ключевые слова
Полный текст
Введение
Атопический дерматит, аллергический ринит и атопическая бронхиальная астма являются частыми заболеваниями в детском возрасте. В патогенезе этих заболеваний главная роль принадлежит эндогенным факторам [1–7]: наследственной предрасположенности, атопии, гиперреактивности кожи (при атопическом дерматите), гиперреактивности слизистой оболочки носа (при аллергическом рините), гиперреактивности бронхов (при бронхиальной астме). Отличие атопических заболеваний от других аллергопатий заключается в том, что развитие первых может быть вызвано только аллергической реакцией немедленного типа, тогда как развитие вторых – аллергическими реакциями любого типа. В основе атопии лежат нарушения иммунитета, приводящие к возникновению дисбаланса между Th1- и Th2-клетками в сторону повышения активности последних. Th2-клетки синтезируют IL-4, IL-10 и IL-13, которые стимулируют продукцию IgE В-клетками, индуцируют активность и пролиферацию эозинофилов, увеличивают экспрессию антигенов главного комплекса гистосовместимости, служат факторами роста тучных клеток. Манифестация атопических заболеваний у предрасположенных детей происходит при воздействии этиологически значимых аллергенов и других экзогенных факторов.
Принимая во внимание схожесть звеньев патогенеза, можно предположить, что у детей с атопическими заболеваниями существует ассоциативная связь с одними и теми же иммуногенетическими параметрами. Однако в ходе собственных исследований выявлены существенные различия в распределении антигенов главного комплекса гистосовместимости при атопических заболеваниях.
Цель исследования – определить особенности распределения антигенов главного комплекса гистосовместимости у больных атопическим дерматитом, у больных атопическим дерматитом с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом, у больных самостоятельным персистирующим аллергическим ринитом и больных атопической бронхиальной астмой.
Материалы и методы исследования
Под наблюдением в КОГБУЗ «Кировская областная детская клиническая больница» (главный врач – д-р мед. наук Н.Г. Муратова) и КОГБУЗ «Детский клинический консультативно-диагностический центр» (главный врач – М.В. Савинова) находилось 137 детей восточнославянской принадлежности в возрасте 5–10 лет с атопическими заболеваниями. У 34 пациентов отмечалось среднетяжёлое течение атопического дерматита (АтД), у 25 пациентов – среднетяжёлое течение АтД с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом (ПАР), у 25 пациентов – среднетяжёлое течение самостоятельного ПАР, у 53 пациентов – среднетяжёлое течение атопической бронхиальной астмы (АтБА). У наблюдаемых больных исследовали иммуногенетические параметры в лаборатории иммуногематологии (руководитель – д-р мед. наук Е.В. Бутина) ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» ФМБА России.
Серологическое типирование лимфоцитов по HLA (Human Leucocytes Antigens) I класса выполнялось у больных в стандартном микролимфоцитотоксическом тесте [8] с помощью гистотипирующих панелей HLA-A и HLA-B (ЗАО «Гисанс», г. Санкт-Петербург), которые позволяют идентифицировать 19 HLA-антигенов локуса А и 35 HLA-антигенов локуса В. Лимфоциты для постановки микролимфоцитотоксической пробы выделяли из гепаринизированной крови методом градиентного центрифугирования с применением раствора фиколл-верографина. Пробу выполняли в микропланшетах Терасаки.
Молекулярное типирование HLA-генов DRB1 и DQB1 (HLA II класса) у наблюдаемых больных выполняли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с набором сиквенс-специфических праймеров, который включает в себя серию различных участков HLA-генов II класса и называется PCR-mSSR (polymerase-chain reaction sequence primer mixed). Набор реагентов позволяет выявлять 14 аллелей гена DRB1 (DRB1*01, 04, 07, 08, 09, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18) и 12 аллелей и групп аллелей гена DQB1 (DQB1*0201, 0301, 0302, 0303, 0304, 0305, 0401-2, 0501-4, 0503, 0601, 0602-8). ДНК выделяли из мононуклеаров крови пациентов путём трёхкратной обработки лизирующим буфером и центрифугированием. Выделенную ДНК амплифицировали в полимеразной цепной реакции.
Расчёт иммуногенетических параметров у наблюдаемых больных осуществляли с помощью формул, принятых в популяционной статистике. Частоту встречаемости конкретных HLA определяли как процентное отношение индивидов, несущих данный HLA, к общему числу обследованных в группе [3], и сопоставляли с характером распределения HLA в здоровой популяции детей, проживающих в Кировской области РФ.
Для установления существенности различий в характере распределения HLA в сравниваемых группах определяли критерий согласия (χ2) с поправкой на непрерывность вариаций по формуле: χ2 = [(ad – bc) – 0,5]2/ (a + b) × (c + d) × (a + c) × (b + d), где а – количество пациентов, имеющих данный антиген, аллель или сочетание, b – количество пациентов, у которых данный антиген, аллель или сочетание отсутствует, с – количество здоровых детей, имеющих данный антиген, аллель или сочетание, d – количество здоровых детей, у которых отсутствует данный антиген, аллель или сочетание. С помощью специальных математических формул χ2 переводили в уровень значимости различий Стьюдента (р).
Степень ассоциации того или иного иммуногенетического параметра с особенностями иммунологической реактивности у больных оценивали по критерию относительного риска (RR) по формуле: RR = fn × (1 – fk) / fk × (1 – fn), где fn – частота встречаемости антигена в исследуемой группе (в десятичных дробях), fk – частота встречаемости того же антигена в контрольной группе (в десятичных дробях). Показатель относительного риска (RR) обнаруживает, насколько чаще данное заболевание или ответная реакция организма развивается у лиц, имеющих определённый HLA-антиген, по сравнению с теми, у кого его нет. При нулевом значении одного из составляющих величину RR рассчитывали по формуле J. Haldane [6]. Принято считать, что при RR, равном 2,0 и больше, существует положительная ассоциация признака с заболеванием (предрасположенность к развитию болезни), тогда как значения RR меньше 1,0 указывают на резистентность индивида к данной патологии.
Этиологическую фракцию (EF), характеризующую силу положительной HLA-ассоциации [7], рассчитывали при значении величины критерия относительного риска RR больше 2,0 по формуле: , где F – частота встречаемости HLA, выраженная в десятичных дробях. Превентивную фракцию (PF), характеризующую силу отрицательной HLA-ассоциации [7], рассчитывали при значении величины критерия относительного риска RR меньше 1,0 по формуле: , где F – частота встречаемости HLA, выраженная в десятичных дробях. При одинаковых значениях критерия относительного риска RR значение EF будет больше в том случае, когда связанный с развитием болезни HLA-маркер имеет большое распространение. В случае, если критерий относительного риска RR меньше 1,0 (при уменьшенном риске развития заболевания), вместо EF (этиологическая фракция) используют PF (превентивная фракция). Данный показатель характеризует превентивные свойства определённого HLA-маркера на популяционном уровне, а также зависит как от показателя RR, так и от частоты встречаемости данного HLA-маркера в исследуемой группе.
Математическую обработку результатов HLA-типирования у больных выполняли на персональном компьютере с использованием специальной программы, составленной сотрудниками лаборатории иммуногематологии ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» ФМБА России на основании указанных выше формул. Контрольную группу в этих исследованиях составили 153 практически здоровых ребёнка.
Результаты и их обсуждение
Результаты, полученные при исследовании распределения антигенов главного комплекса гистосовместимости в группах детей с атопическими заболеваниями, представлены в таблице.
Антигены HLA-комплекса у детей с атопическими заболеваниями
HLA | Частота выявления, % | χ2 | р | RR | EF | PF | |
здоровые дети, n = 153 | больные | ||||||
Больные АтД, n = 34 | |||||||
B15 DRB1*13 DQB1*0602-8 DRB1*07 DRB1*11 DQB1*0303 | 7,8 13,6 37,9 30,1 25,2 23,3 | 28,1 32,0 70,0 10,0 10,0 7,0 | 8,9 4,9 8,4 6,0 4,1 5,2 | <0,01 <0,05 <0,01 <0,02 <0,05 <0,05 | 4,6 3,1 3,8 0,3 0,3 0,2 | 0,22 0,22 0,50 – – – | – – – 0,22 0,17 0,18 |
Больные АтД с сопутствующим ПАР, n = 25 | |||||||
B12 B13 DQB1*01 B21 DQB1*302 | 20,3 13,1 31,1 9,1 19,4 | 52,0 48,0 56,0 4,0 4,0 | 10,0 15,5 4,4 0,2 2,4 | <0,01 <0,01 <0,05 0,64 0,12 | 3,3 4,2 2,3 0,4 0,2 | 0,36 0,37 0,31 – – | – – – 0,05 0,13 |
Больные самостоятельным ПАР, n = 25 | |||||||
A10 DQB1*201 B16 DQB1*11 DQB1*303 | 7,8 29,1 13,7 25,2 23,3 | 32,0 64,0 4,0 12,0 4,0 | 10,3 9,2 1,1 1,3 3,6 | <0,01 <0,01 0,30 0,25 0,06 | 3,7 3,2 0,3 0,5 0,2. | 0,23 0,44 – – – | – – 0,09 0,23 0,20 |
Больные АтБА, n = 53 | |||||||
B18 A9 B35 DRB1*01 | 6,5 32,5 24,8 31,1 | 24,5 15,1 9,4 10,1 | 11,1 5,2 4,8 4,0 | <0,01 <0,05 <0,05 0,07 | 4,6 0,4 0,3 0,5 | 0,19 – – – | – 0,21 0,17 0,11 |
Из материала, приведенного в таблице, следует, что в группе больных атопическим дерматитом отмечалась высокая частота встречаемости HLA I класса В15 (28,1 против 7,8 % в контроле; χ2 = 8,9; p < 0,01; RR = 4,6; EF = 0,22), HLA II класса DRB1*13 (32,0 против 13,6 % в контроле; χ2 = 4,9; p < 0,05; RR = 3,1; EF = 0,22) и DQB1*0602-8 (70,0 против 37,9 % в контроле; χ2 = 8,4; р < 0,01; RR = 3,8; EF = 0,50). Представительство в тканях указанных антигенов ассоциировалось с повышением относительного риска развития заболевания в 3,1–4,6 раза (RR = 3,1–4,6). В то же время в группе больных АтД было выявлено выраженное снижение частоты встречаемости HLA II класса DRB1*07 (10,0 против 30,1 % в контроле; χ2 = 6,0; p < 0,02; RR = 0,3; PF = 0,22), DRB1*11 (10,0 против 25,2 % в контроле; χ2 = 4,1; p < 0,05; RR = 0,3; PF = 0,17) и DQB1*0303 (7,0 против 23,3 % в контроле; χ2= 5,2; p < 0,05; RR = 0,2; PF = 0,18), что ассоциировалось с определённой резистентностью к развитию заболевания (RR = 0,17–0,22).
В группе больных АтД с сопутствующим ПАР (см. таблицу) констатировалось выраженное повышение частоты встречаемости HLA I класса В12 (52,0 против 20,3 % в контроле; χ2 = 10,0; p < 0,01; RR = 3,3; EF = 0,36) и В13 (48,0 против 13,1 % в контроле; χ2 =15,5; p < 0,01; RR = 4,2; EF = 0,37), HLA II класса DQB1*01 (56,0 против 31,1 % в контроле; χ2 =4,4; p < 0,05; RR = 2,3; EF = 0,31), что ассоциировалось у носителей указанных признаков с повышением относительного риска развития заболеваний в 2,3–4,2 раза (RR = 2,3–4,2). Вместе с тем в этой группе пациентов обнаруживалось понижение частоты встречаемости HLA I класса В21 (4,0 против 9,1 % в контроле; χ2 = 0,2; RR = 0,4; PF = 0,05) и HLA II класса DQB1*302 (4,0 против 19,4 % в контроле; χ2 = 2,4; RR = 0,2; PF = 0,13), что ассоциировалось с определённой резистентностью к развитию атопического дерматита с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом (RR = 0,2–0,4).
Исследования показали, что в группе больных самостоятельным ПАР имело место выраженное повышение частоты встречаемости в тканях HLA I класса А10 (32,0 против 7,8 % в контроле; χ2 = 10,3; p < 0,01; RR = 3,7; EF = 023) и HLA II класса DQB1*11 (64,0 против 29,1 % в контроле; χ2 = 9,2; p < 0,01; RR = 3,2; EF = 0,44), что ассоциировалось с повышением относительного риска развития заболевания в 3,2–3,7 раза (RR = 3,2–3,7). Также у пациентов этой группы отмечалось понижение частоты встречаемости HLA I класса В16 (4,0 против 13,7 % в контроле; χ2 = 1,1; RR = 0,3; PF = 0,09), HLA II класса DRB1*11 (12,0 против 25,2 % в контроле; χ2 = 1,3; RR = 0,5; PF = 0,23) и DQB1*303 (4,0 против 23,3 % в контроле; χ2 = 3,6; RR = 0,2; PF = 0,20), что ассоциировалось с определённой резистентностью к развитию самостоятельного персистирующего аллергического ринита (RR = 0,2–0,5).
В группе больных АтБА (см. таблицу) констатировалось выраженное повышение встречаемости в тканях HLA I класса В18 (24,5 против 6,5 % в контроле; χ2 = 11,1; р < 0,01; RR = 4,6; EF = 0,19), что ассоциировалось у носителей этого признака с повышением относительного риска развития заболевания в 4,6 раза (RR = 4,6). В то же время у больных АтБА имело место понижение частоты встречаемости в тканях HLA I класса А9 (15,1 против 32,5 % в контроле; χ2 = 5,2; p < 0,05; RR = 0,4; PF = 0,21) и В35 (9,4 против 24,8 % в контроле; χ2 = 4,8; p < 0,05; RR = 0,3; PF = 0,17), HLA II класса DRB1*01 (10,1 против 31,1 % в контроле; χ2 = 4,0; RR = 0,5; PF = 0,11), что ассоциировалось с резистентностью к развитию заболевания (RR = 0,11–0,21).
Выводы
- В группе больных атопическим дерматитом, в группе больных атопическим дерматитом с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом, в группе больных самостоятельным персистирующим аллергическим ринитом и в группе больных атопической бронхиальной астмой выявляется ассоциативная связь с разными антигенами главного комплекса гистосовместимости.
- В качестве иммуногенетического маркера у больных атопическим дерматитом может служить высокая частота встречаемости HLA B15, DRB1*13 и DQB1*0602-8, у больных атопическим дерматитом с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом – HLA B12, B13 и DQB1*01, у больных самостоятельным персистирующим аллергическим ринитом – HLA A10 и DQB1*201, у больных атопической бронхиальной астмой – HLA B Представительство в тканях указанных антигенов HLA-комплекса ассоциируется с увеличением относительного риска возникновения атопических заболеваний в 2,3–4,6 раза.
- При обнаружении высокой частоты встречаемости соответствующих антигенов HLA-комплекса диагноз атопического дерматита, атопического дерматита с сопутствующим персистирующим аллергическим ринитом, самостоятельного персистирующего аллергического ринита и атопической бронхиальной астмы может быть установлен даже при отсутствии клинических проявлений указанных заболеваний (в период клинической ремиссии).
Финансирование. Исследование проводилось в рамках внутривузовского гранта ФГБОУ ВО Кировский ГМУ Минздрава России № 8-2022-грант.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов равноценен.
Об авторах
Я. Ю. Иллек
Кировский государственный медицинский университет
Автор, ответственный за переписку.
Email: yanillek@gmail.com
доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой педиатрии
Россия, КировИ. Г. Суетина
Кировский государственный медицинский университет
Email: yanillek@gmail.com
кандидат медицинских наук, доцент кафедры педиатрии
Россия, КировН. В. Хлебникова
Кировский государственный медицинский университет
Email: yanillek@gmail.com
кандидат медицинских наук, доцент кафедры педиатрии
Россия, КировЕ. В. Суслова
Кировский государственный медицинский университет
Email: yanillek@gmail.com
кандидат медицинских наук, ассистент кафедры педиатрии
Россия, КировМ. В. Савинова
Детский клинический консультативно-диагностический центр
Email: yanillek@gmail.com
главный врач
Россия, КировЭ. В. Дудырева
Детский клинический консультативно-диагностический центр
Email: yanillek@gmail.com
заместитель главного врача по поликлинической работе
Россия, КировЕ. В. Земцова
Детский клинический консультативно-диагностический центр
Email: yanillek@gmail.com
педиатр, аллерголог-иммунолог
Россия, КировСписок литературы
- Балаболкин И.И., Ляпунова А.В., Рылеева И.В. и др. Бронхиальная астма у детей. Детская аллергология: руководство для врачей. Под ред. А.А. Баранова, И.И. Балаболкина. М. 2006; 298–371.
- Балаболкин И.И., Гребенюк В.Н., Кудрявцева А.В. Атопический дерматит. Детская аллергология: руководство для врачей. Под ред. А.А. Баранова, И.И. Балаболкина. М. 2006; 424–485.
- Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. М. 1988; 288.
- Иллек Я.Ю., Зайцева Г.А., Галанина А.В. Атопический дерматит у детей раннего возраста. Киров 2007; 124.
- Иллек Я.Ю., Зайцева Г.А., Муратова Н.Г. Атопическая бронхиальная астма у детей. Киров 2008; 160.
- Певницкий Л.А. Статистическая оценка ассоциаций HLA-антигенов с заболеваниями. Вестник академии медицинских наук СССР 1988; 7: 48–55.
- Svejgaard A., Ryder L.P. HLA and disease associations: detecting the strongest associations. Tissue Antigens 1994; 43: 18–27.
- Terasaki P.I. Microdroplet lymphocyte cytotoxicity: manual of tissue tuping technique. Bethseda 1970; 42–45.
Дополнительные файлы
![](/img/style/loading.gif)