ВЛИЯНИЕ ПРЕНАТАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ КОМПЛЕКСА ВИТАМИНОВ НА ПРОЯВЛЕНИЯ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ У ПОТОМСТВА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ

Полный текст

Введение Назначение комплексных витаминных препаратов беременным является общемировой практикой [6, 7]. Данные о зависимости аллергических реакций от приема витаминов достаточно противоречивы. Так, в ряде исследований доказана связь между пищевой аллергией и уровнем витамина Д [6], в других исследованиях корреляции между проявлением аллергического ринита и приемом витамина Д во время беременности не установлено [5]. Целью данной работы явилась оценка влияния пренатального введения поливитаминных комплексов экспериментальным животным на развитие аллергических реакций у потомства. Материалы и методы исследования В работе были использованы половозрелые самки белых нелинейных крыс средней массой 231,6 ± 17,5 г, которые ссаживались с самцами 1:3. При наступлении беременности самки были поделены на две группы. Самкам первой группы перорально вводился комплекс витаминов в терапевтической дозе (1-я группа, ТД), второй - в 5-кратной дозе (2-я группа, 5ТД) в пересчете на крыс согласно общепринятым коэффициентам [4] на протяжении всего периода беременности (28-30 дней). В состав комплексного витаминного препарата входили витамин С (120 мг), витамин РР (20 мг), витамин Е (30 мг), фолиевая кислота (0,8 мг) и т.д. Всего более 20 компонентов, включая микроэлементы селен, хром. Контрольные животные получали воду очищенную в эквивалентных количествах. Потомство от самок, получавших терапевтическую дозу витаминов, было разделено на две группы: группа животных, сенсибилизированных перорально аналогичными дозами витаминов в течение 7 дней (n = 8), и группа животных, не принимавших витамины после рождения (n = 8). Аналогично было разделено потомство от самок, получавших пятикратную дозу витаминов (две группы по 8 животных). Контрольные животные также были разделены на две группы: группа интактного контроля (n = 8) и животные контрольной группы, сенсибилизированные перорально терапевтической дозой витаминов в течение 7 дней (n = 8). Аллергические реакции были оценены в тесте гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и в тесте дегрануляции тучных клеток по стандартным методикам [3]. Кроме того, была изучена лейкоцитарная формула путем микроскопирования мазка периферической крови [1]. Постановку аллергических реакций и взятие крови на анализ для оценки количественного содержания лимфоцитов, гранулоцитов, моноцитов проводили по достижении потомством возраста 1 месяц, что соответствует 5-летнему возрасту человека [3]. Часть животных в каждой группе была подвергнута эвтаназии с последующим забором внутренних иммунокомпетентных органов, у которых были рассчитаны массовые коэффициенты по общепринятой формуле [2]. Для постановки реакции ГЗТ крысят сенсибилизировали путем однократного подкожного введения в основание хвоста суспензии поливитаминных комплексов в терапевтической дозе (1ТД) и пятикратно увеличенной терапевтической дозе (5ТД) в полном адъюванте Фрейнда. Развитие реакции ГЗТ индуцировали введением в подушечку задней лапы раствора соответствующей дозы препарата в растворе Хенкса спустя 5 дней. Реакцию оценивали онкометрически по изменению объема лап через 6 и 24 часа. Полученные результаты сравнивали с показателями контрольной группы и между собой с использованием t-критерия Стьюдента. Отличия считали достоверными при р < 0,05. При постановке реакции непрямой дегрануляции тучных клеток крыс подвергали эвтаназии, вводили внутрибрюшинно 5 мл подогретого до 37 °С раствора Тироде без глюкозы, после легкого массажа брюшной стенки в течение 1-1,5 мин производили ножницами разрез по средней линии длиной 1,5-2 см, переворачивали тушку вниз и собирали экссудат, стекающий с петель кишечника в смоченную гепарином пробирку. Препараты готовили на обезжиренных предметных стеклах, окрашенных 0,3%-ным спиртовым раствором нейтрального красного и высушенных при комнатной температуре. К 0,03 мл взвеси тучных клеток добавляли 0,03 мл сыворотки полученного препарата животного и 0,03 мл специфического аллергена (исследуемой дозы витамина в разведении 1:100). Оценку результатов проводили дифференциальным способом учета, подсчитывая показатель дегрануляции тучных клеток (ПДТК) по формуле где a, b, c, d - количество (среднее из трех повторений) дегранулированных клеток соответственно степени дегрануляции (слабовыраженной, умеренной, резкой и степени полностью дегранулированных клеток). В каждой камере подсчитывали 100 клеток. Кроме того, был рассчитан массовый коэффициент иммунокомпетентных органов, для чего у части животных, подверженных эвтаназии, были извлечены и взвешены тимус и селезенка. Анализ периферической крови проводили путем подсчета агранулоцитов и гранулоцитов в мазке. Результаты и их обсуждение Реакция гиперчувствительности замедленного типа. В тесте постановки реакции ГЗТ средний процент прироста объема лап животных в группе потомства, полученного от группы животных, принимавших витамины в терапевтической дозе, достоверно не отличался от контрольной группы, в равной степени как у сенсибилизированных, так и несенсибилизированных крыс (табл. 1). Так, для несенсибилизированных животных, полученных от самок, которым вводили витамины в дозе 1ТД, прирост составил 41,3 ± 16,2 %, в контрольной группе животных от интактных самок объем лапы изменился на 35,2 ± 13,5 %. Схожие значения были получены в группах крыс, сенсибилизированных перорально в течение 7 дней: 37,6 ± 13,6 % составил прирост в экспериментальной группе 1ТД, и 35,2 ± ± 12,9 % - в контрольной. Динамика уменьшения отека также была сопоставима в группах 1ТД как сенсибилизированного, так и несенсибилизированного потомства (снижение объема лапы на 14,8 ± 5,3 и 15,2 ± 4,7 % соответственно) и схожа с показателями контрольной группы, получавшей витамины. В контрольной группе животных, остававшихся интактными отмечено полное отсутствие аллергической реакции спустя 24 часа от начала эксперимента. Существенные отличия были обнаружены в группах, получавших дозу 5ТД. Реакция в группе несенсибилизированного потомства была в 3 раза больше (прирост объема лапы на 108,4 ± 31,9 %) в сравнении с контрольной группой как сенсибилизированного, так и несенсибилизированного потомства. При этом реакция в группе потомства от самок, получавших дозу 5ТД, сенсибилизированного витаминами в течение 7 дней, была также достоверно больше и превышала значения контрольных групп в 1,7 раза. Снижение отека и проявления аллергической реакции в группе несенсибилизированного потомства были практически сопоставимы с контрольными группами. В группе потомства, получавшей витамины, процент уменьшения отека через 24 часа был в 2 раза больше, чем у животных контрольной группы, получавшей витамины (35,3 ± 6,4 и 18,3 ± 4,9 % соответственно). Обращают на себя внимание отличия в контрольных группах животных. При совпадении выраженности отека и, соответственно, проявлении аллергической реакции спустя 6 часов была обнаружена статистически значимая разница в динамике снижения отека, в частности процент уменьшения объема лапы в группе не получавших витамины животных был в 1,7 выше, чем в группе сенсибилизированных животных, и полученные значения через 24 часа практически совпадали с фоновыми данными (см. табл. 1). Таблица 1 Влияние пренатального введения комплекса витаминов в терапевтической и пятикратно увеличенной дозе на результаты теста замедленной гиперчувствительности у потомства белых крыс Группа потомства Cенсибилизированные 7 дней перорально Несенсибилизированные прирост объема лапы, % уменьшение объема, % прирост объема лапы, % уменьшение объема, % через 6 часов через 24 часа через 6 часов через 24 часа 1-я (ТД) 37,6 ± 13,6 22,9 ± 5,6 14,8 ± 5,3 41,3 ± 16,2 26,0 ± 13,9# 15,2 ± 4,7# 2-я (5ТД) 59,2 ± 21,2*# 23,9 ± 13,1 35,3 ± 6,4* 108,4 ± 31,9*# 86,4 ± 31,8*# 22,0 ± 6,0 Контроль 35,2 ± 12,9 16,9 ± 3,9 18,3 ± 4,9& 35,2 ± 13,5 7,4 ± 8,3 30,7 ± 8,0 Примечание: * р < 0,05 при сравнении соответствующего аналогичного параметра с параметром группы сенсибилизированного контроля; использован t-критерий Стьюдента; # р < 0,05 при сравнении соответствующего аналогичного параметра с показателем группы несенсибилизированного контроля; использован t-критерий Стьюдента; & р < 0,05 при сравнении с группой несенсибилизированного контроля; использован t-критерий Стьюдента. Тест непрямой дегрануляции тучных клеток. Для несенсибилизированного потомства показатель дегрануляции тучных клеток (ПДТК) был сопоставим в группе 1ТД и в группе 5ТД и составил соответственно 0,51 ± 0,10 и 0,44 ± 0,05, превышая значения интактной контрольной группы в 2,0-2,5 раза (0,18 ± 0,04). Показатель дегрануляции тучных клеток в экспериментальной группе потомства, получавшего перорально витамины, равный 0,73 ± 0,08, был достоверно выше контрольной группы в 2,5 раза (0,29 ± 0,05) и практически аналогичен группе, получавшей пятикратную дозу витаминов (0,62 ± 0,13). Необходимо отметить, что значение ПДТК контрольной группы, сенсибилизированной перорально в течение 7 дней, равное 0,29 ± 0,05, было достоверно выше ПДТК контрольной группы, состоявшей из интактных животных (0,18 ± 0,04) (табл. 2). Таблица 2 Влияние пренатального введения комплекса витаминов на реакцию дегрануляции тучных клеток у потомства Группа животных Сенсибилизированные (7 дней перорально) Несенсибилизированные 1ТД 0,73 ± 0,08* 0,51 ± 0,10#& 5ТД 0,62 ± 0,13* 0,44 ± 0,05#& Контроль 0,29 ± 0,05 0,18 ± 0,04 Примечание: * р < 0,05 при сравнении с группой сенсибилизированного контроля; использован t-критерий Стьюдента; # р < 0,05 при сравнении с группой несенсибилизированного контроля; использован t-критерий Стьюдента; & р < 0,05 при сравнении с соответствующей сенсибилизированной группой; использован t-критерий Стьюдента. Массовые коэффициенты (МК) иммунокомпетентных органов рассчитывали по формуле [2] МК = Масса органа, г 1000 / Масса тела, г. Было установлено достоверное снижение массового коэффициента селезенки в группе потомства, которое не было сенсибилизировано в течение 7 дней, при сравнении с показателем контрольных групп. Отличий в массовых коэффициентах тимуса во всех экспериментальных группах не отмечено (табл. 3). Анализ периферической крови проводился путем подсчета лейкоцитарной формулы в мазках по общепринятой методике у потомства от самок, получавших терапевтическую и пятикратную дозы витаминов. Статистически значимых изменений в количестве и соотношении агранулоцитов и гранулоцитов во всех группах потомства обнаружено не было (табл. 4). Количество лимфоцитов составляло 75-85 %, нейтрофилы в пределах 15-20 %. Таблица 3 Массовые коэффициенты иммунокомпетентных органов потомства, полученного от самок, принимавших комплексы витаминов в терапевтической и пятикратной дозе Группа потомства Сенсибили-зированные Несенсибили-зированные селезенка тимус селезенка тимус 1ТД 6,9 ± 1,6 5,1 ± 1,1 4,0 ± 1,0*# 5,0 ± 0,9 5ТД 7,8 ± 1,9 4,2 ± 1,2 4,7 ± 1,2*# 4,6 ± 0,6 Контроль 7,0 ± 1,1 4,1 ± 0,8 6,0 ± 1,1 4,7 ± 1,1 Примечание: * р < 0,05 при сравнении с группой сенсибилизированного контроля; использован t-критерий Стьюдента; # р < 0,05 при сравнении с группой несенсибилизированного контроля; использован t-критерий Стьюдента. Таблица 4 Влияние пренатального введения витаминных комплексов на показатели лейкоцитарной формулы у потомства, % Показатель Группа потомства от самок, получавших дозы витаминов 1ТД 5ТД контроль Лимфоциты 78,2 ± 4,8 84,3 ± 7,5 85,7 ± 8,3 Нейтрофилы 20,2 ± 4,0 14,0 ± 7,7 13,1 ± 8,8 Эозинофилы 1,0 ± 1,0 2,0 ± 1,1 1,0 ± 1,0 Базофилы 1,0 ± 1,1 1,1 ± 1,0 1,0 ± 1,0 Моноциты 3,0 ± 1,0 1,0 ± 1,0 2,0 ± 0,8 Выводы У потомства, полученного от самок, принимавших в течение беременности пятикратную дозу витаминов, было отмечено усиление аллергической реакции замедленного типа, в 1,7-3,0 раза по сравнению с контрольными группами, при этом сенсибилизация данного потомства витаминами в течение 7 дней перорально снижала проявление реакции. Тем не менее статистически значимо были превышены показатели контрольных групп и групп животных от самок, получавших в течение беременности терапевтические дозы витаминов, проявления реакции гиперчувствительности замедленного типа в которых были практически сопоставимы. В реакции немедленного типа было установлено статистически значимое превышение показателя дегрануляции тучных клеток во всех экспериментальных группах в 2,0-2,5 раза в сравнении с контрольными группами, при этом показатели дегрануляции тучных клеток в группах животных, сенсибилизированных перорально в течение 7 дней, были достоверно выше в 1,4 раза, чем в группах потомства, не получавших витамины. В обеих группах несенсибилизированного потомства было отмечено уменьшение массового коэффициента селезенки. Влияния на лейкоцитарную формулу периферической крови потомства во всех экспериментальных группах не обнаружено. Таким образом, пренатальное введение самкам крыс комплексов витаминов изменяет проявления у потомства аллергических реакций как немедленного, так и замедленного типов, причем введение потомству, полученному от указанных самок, витаминов в течение 7 дней, также неоднозначно влияет на течение аллергических реакций.

Об авторах

Елена Андреевна Зенкова

Пермский государственный медицинский университет им. академика Е.А. Вагнера

Email: EAZenkova@mail.ru
старший преподаватель кафедры фармакологии, аспирант кафедры фармакологии 614000, г. Пермь, ул. Петропавловская, 26

Павел Андреевич Кулеш

Пермский государственный медицинский университет им. академика Е.А. Вагнера

студент лечебного факультета 614000, г. Пермь, ул. Петропавловская, 26

Александра Александровна Багаева

Пермский государственный медицинский университет им. академика Е.А. Вагнера

студент лечебного факультета 614000, г. Пермь, ул. Петропавловская, 26

Список литературы

Дополнительные файлы