Experimental study of neuropsychotropic activity
- Authors: Krasnova A.I.1, Pulina N.A.1, Polezhaeva V.D.1
-
Affiliations:
- Perm State Pharmaceutical Academy
- Issue: Vol 40, No 3 (2023)
- Pages: 139-145
- Section: Biology and experimental medicine
- URL: https://permmedjournal.ru/PMJ/article/view/258608
- DOI: https://doi.org/10.17816/pmj403139-145
- ID: 258608
Cite item
Full Text
Abstract
Objective. To study the neuropsychotropic activity of 2,4-dioxobutanoic acid derivatives containing a fragment of benzimidazole as well as to determine the relationship between the structure of substances and their biological effects.
Materials and methods. The spectrum of neuropsychotropic activity of 2,4-dioxobutanoic acid derivatives with benzimidazole was studied on experimental animals using the «open field», «black-and-white camera», and «extrapolation deliverance» tests.
Results. A compound with potential anxiolytic properties has been identified. The dependence of the manifestation of anxiogenic or anxiolytic properties in the presence of mono- or bicyclic arenes in the structure, respectively, is shown.
Conclusions. 2,4-Dioxobutane acids containing a fragment of benzimidazole are of interest for the search for substances with neuropsychotropic activity. The results of the “structure-activity” analysis should be used in further targeted synthesis.
Full Text
Введение
Бензимидазольный гетероцикл является одним из важнейших среди привилегированных фармакофорных фрагментов, используемых в направленном синтезе биологически активных соединений, поскольку его производные могут представлять собой структурные изостеры встречающихся в природе нуклеотидов, что позволяет прогнозировать их взаимодействие с биополимерами живых систем и огромный терапевтический потенциал в различных областях фармакологии [1; 2]. Так, известно, что бензимидазольный каркас является молекулярной основой агонистов и антагонистов трансмембранных рецепторов, сопряженных с G-белком, являющихся мишенью до 40 % выпускаемых лекарств [3]. Одним из перспективных направлений разработок производных бензимидазола является создание лекарственных средств нейропсихотропного профиля, так, среди лекарственного ассортимента Российской Федерации успешно применяются афобазол® (4-[2-[(6-этокси-1H-бензимидазол-2-ил) сульфанил]этил]морфолин), метапрот® (этилтиобензимидазола гидробромида моногидрат) и др. [4]. Учитывая необходимость разработки перспективных фармакологически активных веществ с целевой специфической активностью при минимуме побочных и токсических эффектов, а также приемлемыми фармакокинетическими характеристиками, особый интерес представляет синтез бензимидазольных производных на основе одного из важнейших метаболитов организма – пирувата. В проведенных ранее фармакологических исследованиях ароилпируватов гетериламмония были выявлены соединения, проявляющие высокую биологическую активность [5; 6]. Таким образом, для получения новых высокоактивных веществ актуальным является синтез соединений на основе 2,4-диоксобутановых кислот с использованием привилегированной подструктуры – бензимидазольного гетероцикла с последующим изучением нейропсихотропной активности и корреляционного анализа «структура – активность» среди полученных соединений.
Цель исследования – изучить спектр нейропсихотропной активности 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноатов и установить связь строения веществ с их биологическим действием.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования являлись синтезированные 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноаты бензимидазолиламмония 1 а-г. Температуру плавления (разложения) определяли на приборе «ПТП-2» (Россия) по методу 1 Государственной Фармакопеи Российской Федерации XIV издания [7]. ИК-спектры записаны на приборе «ФСМ-1201» (Россия) в виде пасты в вазелиновом масле. Спектры ЯМР 1Н записаны на приборе Varian Mercury Plus (300 МГц), внутренний стандарт – ГМДС, растворитель ДМСО-d6.
Изучение нейропсихотропной активности исследуемых веществ осуществляли в психофармакологических тестах в стандартной модификации: «Открытое поле», «Черно-белая камера», «Экстраполяционное избавление» [8].
Тест «Открытое поле» проводили на белых нелинейных крысах, согласно стандартной методике [8]. Показатели активности животных: горизонтальную (количество пересеченных квадратов) и вертикальную (число подъемов на задние лапы – стоек) двигательную, поисковую (количество заглядываний в отверстия) активность, груминг (число касаний морды лапами, умывание), а также дефекацию (количество болюсов) регистрировали в течение 3-минутной экспозиции. Для оценки тревожности и реакции на новизну обстановки экспериментальных животных помещали в установку «Черно-белая камера», состоящую из светлого (390 лк) и темного отсеков, разделенных непрозрачной перегородкой, в которой имеется переход (4 см). В ходе эксперимента в течение 3 мин регистрировали: латентный период (время, прошедшее от момента посадки животного на светлую сторону до первого перехода в темный отсек установки), общее время пребывания в светлом отсеке и количество переходов между отсеками. Тестирование «Экстраполяционное избавление» заключалось в помещении крыс в экспериментальную установку, которая состоит из внутреннего цилиндра из прозрачного пластика, вмонтированного во внешнюю емкость (бак). Бак заполняют водой (t = 21–23 °С) с расчетом погружения внутреннего цилиндра в воду на 2 см. После помещения животных в установку в течение 2-минутной экспозиции регистрировали латентный период подныривания под край цилиндра и долю (%) животных, решивших экстраполяционную задачу. Во всех психофармакологических исследованиях изучаемые соединения, препарат сравнения флуоксетин вводили внутрижелудочно за 60 мин до начала тестов в скрининговой дозе 50 мг/кг. Контрольной группе крыс вводилась дистиллированная вода.
Полученные экспериментальные данные статистически обрабатывали с использованием расширенного пакет-анализа Microsoft Excel 2010. Высчитывали среднее значение и его стандартную ошибку (M ± SEM). Полученные результаты проверяли на нормальность распределения с использованием критерия Шапиро – Уилка. Для оценки средних значений при нормальном распределении использовали t-критерий Стьюдента, при распределении, отличающемся от нормального, использовали непараметрический U-критерий Манна – Уитни. Гипотезу о существовании различий между выборками принимали при уровне р < 0,05.
Результаты и их обсуждение
Синтез изучаемых 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноатов бензимидазолиламмония 1 а-г, включая исходные производные, осуществляли по методикам, описанным в работе [6].
Тест «Открытое поле» является одним их ведущих инструментов оценки индивидуально-типологических особенностей поведения мелких экспериментальных животных. Помещение крысы в установку «Открытое поле» сопровождается развитием определенной стрессовой реакции, отражающейся на поведении животного – двигательная активность (горизонтальная, вертикальная) и норковый рефлекс в совокупности определяют состояние активно-поисковой компоненты поведения, а уровень дефекаций и груминг – пассивно-оборонительной [8].
Изучение воздействия исследуемых соединений на активно-поисковую компоненту поведения в тесте «Открытое поле» показало, что при введении бутеноатов 1а, 1б, содержащих фенильный и п-метилфенильный радикал, наблюдалось достоверно уменьшение количества обследованных полей и обследованных отверстий по сравнению с показателями контроля и препарата сравнения флуоксетин, что свидетельствует о некотором угнетении локомоторной и ориентировочно-исследовательской активности (рис. 1, а), при этом показатели эмоционального состояния (груминг, количество болюсов) оказались сопоставимы с данными контроля и препаратом сравнения (рис. 1, б).
Рис. 1. Влияние исследуемых веществ на показатели: а – активно-поисковой компоненты поведения животных (M ± SEM): * – отличия статистически значимы по отношению к контролю; # – отличия статистически значимы по отношению к препарату сравнения (р < 0,05, t-критерий Стьюдента); б – пассивно-оборонительной компоненты поведения животных (M ± SEM): отличия статистически значимы * – по отношению к контролю; # – по отношению к препарату сравнения (р < 0,05, t-критерий Стьюдента)
Выявлено, что введение соединений 1в, 1г, содержащих нафтильный фрагмент, не оказывало негативного влияния на поведенческие реакции животных. Показатели локомоторной и исследовательской активности при введении вещества 1в не отличались от значений контрольной группы, а у бутеноата 1г – оказались сопоставимы с данными флуоксетина (см. рис. 1), для которого наблюдалась тенденция проявления психостимулирующего эффекта, что сопровождалось некоторым подавлением естественного страха животных перед открытой освещенной местностью и преобладанием исследовательского интереса к новому неизученному пространству.
Процедура тестирования поведения в «Черно-белой камере» предоставляет животному возможность выбора: или активное исследование новой ситуации (светлый отсек), или предпочтение нахождения в пределах темного ограниченного пространства (экологически характерная для грызунов форма защитного поведения). В проведенном тесте выявлено, что при введении соединений 1а, 1б наблюдалась активация защитного поведения с вероятной повышенной тревожностью, о чем свидетельствовал быстрый переход крыс в темный отсек и преимущественное нахождение в нем, а также минимальное число переходов из отсека в отсек. При введении бутеноатов 1в, 1г показатели тревожного профиля поведения менялись – латентный период и общее время, проведенное в светлом отсеке, для вещества 1в статистически не отличались от данных контроля, при введении бутеноата 1г – наблюдалось статистически значимое увеличение времени пребывания животных в светлом отсеке и рост числа переходов на уровне флуоксетина, что может быть расценено как возможное проявление некоторого анксиолитического действия (рис. 2).
Рис. 2. Влияние исследуемых веществ на показатели тревожности животных в условиях теста «Черно-белая камера» (M ± SEM): отличия статистически значимы * – по отношению к контролю; # – по отношению к препарату сравнения (р < 0,05, t-критерий Стьюдента); а – реактивность животных и общее время, проведенное в светлой камере, с; б – число переходов между отсеками
В тесте «Экстраполяционное избавление» все животные, получавшие исследуемые производные, решали задачу экстраполяционного избавления от аверсивной среды, что может свидетельствовать об отсутствии негативного воздействия изучаемых веществ на когнитивный потенциал животных. Достоверных различий с контролем и флуоксетином по показателю латентного периода подныривания не выявлено, однако для соединения 2а наблюдалась статистически незначимая тенденция к сокращению времени решения задачи по преодолению острой стресс-ситуации (рис. 3).
Рис. 3. Влияние исследуемых веществ на решение острой стресс-ситуации животными в тесте «Экстраполяционное избавление» (M ± SEM): отличия статистически значимы * – по отношению к контролю; # – по отношению к препарату сравнения (р < 0,05, t-критерий Стьюдента)
Экспериментальное изучение нейропсихотропной активности исследуемых бутеноатов бензимидазолиламмония показало, что наличие фенильного радикала в 4-м положении ароилпирувата обеспечивает преобладание анксиогенного профиля поведения животных, о чем свидетельствует угнетение локомоторной, ориентировочно-исследовательской активности в открытом поле и активизация защитного поведения в черно-белой камере. Однако в случае наличия в качестве арила нафтильного фрагмента у изучаемых производных наблюдается обратная тенденция в поведении животных с появлением анксиолитического профиля.
Выводы
Таким образом, исследование нейропсихотропной активности новых производных 2,4-диоксобутановых кислот, содержащих бензимидазольный фрагмент, позволило выявить соединение с потенциальными анксиолитическими свойствами. Выявлено, что появлению анксиолитических свойств способствует наличие в структуре бициклического фрагмента. Результаты корреляционного анализа «структура – активность» способствуют усовершенствованию целенаправленного синтеза и повышению эффективности разработок лекарственных веществ в области психофармакологии.
About the authors
Anastasiya I. Krasnova
Perm State Pharmaceutical Academy
Author for correspondence.
Email: krasnova_ai@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5363-8783
SPIN-code: 3520-1728
Scopus Author ID: 56430747900
Candidate of Pharmaceutical Sciences, Associate Professor, Department of Pharmacology
Russian Federation, PermNataliya A. Pulina
Perm State Pharmaceutical Academy
Email: pulina-nata@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0435-0484
SPIN-code: 3972-0441
Scopus Author ID: 7801572754
Doctor of Pharmaceutical Sciences, Professor, Head of the Department of Pharmaceutical Technology
Russian Federation, PermValeriya D. Polezhaeva
Perm State Pharmaceutical Academy
Email: polezgaevalera@inbox.ru
postgraduate student, Assistant of the Department of Pharmaceutical Technology
Russian Federation, PermReferences
- Brishty S.R., Hossain M.J., Khandaker M.U., Faruque M.R.I., Osman H., Rahman S.M.A. A Comprehensive Account on Recent Progress in Pharmacological Activities of Benzimidazole Derivatives. Front Pharmacol 2021; 12: 762–807.
- Duarte C.D., Barreiro E.J., Fraga C.A. Privileged structures: a useful concept for the rational design of new lead drug candidates. Mini Rev Med Chem. 2007; 7 (11): 1108–19.
- Hauser A.S., Attwood M.M., Rask-Andersen M., Schiöth H.B., Gloriam D.E. Trends in GPCR drug discovery: new agents, targets and indications. Nat Rev Drug Discov. 2017; 16 (12): 829–842.
- Encyclopedia of medicines 2020 of the Russian register of medicines. Moscow: VEDANTA 2019: 1536 (in Russian).
- Pulina N.A., Sobin F.V., Yushkova T.A., Krasnova A.I., Yushkov V.V. 2-Hydroxy-4-methylphenyl-4-oxo-2-butenoate of thiazonyl ammonium, possessing hypoglycemic and nootropic activity: Patent RF № 2512291 from 26.07.2011: available at: http://www.findpatent.ru/patent/251/2512291.html (in Russian).
- Pulina N.A., Sobin F.V., Syropyatov B.Ya., Mokin P.A., Kovaleva M. Yu. Synthesis and anticoagulant activity of α-oxocarbonic acid derivatives. Pharm. Chem. J. 2012; 46 (12): 15–18 (in Russian).
- State Pharmacopoeia of the Russian Federation of the Ministry of Health of the Russian Federation 14th ed. Мoscow 2018: 1: 1814 (in Russian).
- Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Part One. Pod red. A.N. Mironova. Мoscow: Grif i K. 2013; 944 (in Russian).