Effect of ozonotherapy on clinical and immunological indicators in children with allergic rhinitis

Full Text

Введение

Аллергический ринит является наиболее распространённой аллергопатией [1–3]. У детей с атопическим дерматитом часто диагностируется сопутствующий аллергический ринит, также у детей аллергический ринит может возникнуть как самостоятельное заболевание, и его проявления обычно начинают отмечаться в возрасте 4–6 лет. В развитии аллергического ринита важная роль принадлежит наследственной предрасположенности, атопии и гиперреактивности слизистой оболочки носа. Пусковыми факторами аллергического ринита выступают бытовые, эпидермальные, пыльцевые, грибковые, вирусные и бактериальные аллергены [4–7]. В соответствии с классификацией J. Bousquet (2001), рекомендованной экспертами ВОЗ (2003) для применения в клинической практике, выделяют [8, 9] интермиттирующий (сезонный, острый, случайный) и персистирующий (круглогодичный, хронический, длительный) аллергический ринит.

Современное комплексное лечение детей с аллергическим ринитом базируется на элиминации аллергенов, применении деконгестантов, антигистаминных препаратов, кромонов и интраназальных глюкокортикостероидов [10, 11]. Однако современная комплексная терапия часто недостаточно эффективна и не обеспечивает наступление продолжительной клинической ремиссии у больных персистирующим аллергическим ринитом.

В настоящее время в комплексном лечении ряда острых и хронических заболеваний у взрослых и детей разного возраста успешно применяют озонотерапию, которая обладает противовоспалительным обезболивающим, дезинтоксикационным, бактерицидным, вируцидным, фунгицидным, антиоксидантным и иммуномодулирующим действиями, активирует метаболизм [12, 13]. Однако в литературе отсутствуют данные об использовании озонотерапии в комплексе лечебных мероприятий у детей с аллергическим ринитом, что послужило основанием для проведения настоящего исследования.

Цель исследования – определить клинический, иммуномодулирующий и противорецидивный эффекты озонотерапии при среднетяжёлом персистирующем аллергическом рините у детей.

Материалы и методы исследования

Под наблюдением находились 100 детей в возрасте 5–10 лет (57 мальчиков и 43 девочки) со среднетяжёлым персистирующим аллергическим ринитом (ПАР), которых разделили на две группы в зависимости от проводимой терапии. Первая группа (47 пациентов) получала комплексную общепринятую терапию, вторая (53 пациента) – комплексное лечение в сочетании с озонотерапией.

Родителям пациентов обеих групп давали советы по созданию гипоаллергенных условий быта, пациентам рекомендовали индивидуальную гипоаллергенную диету. Больным первой группы назначали зиртек (внутрь по 10 капель один раз в день в течение двух недель), називин в виде спрея (0,05%-ный по одной ингаляции два раза в день в течение недели), авамис в виде спрея (впрыскивание по одной дозе (27,5 мкг) в каждый носовой ход один раз в день в течение двух недель). Больным второй группы назначали в целом такое же комплексное лечение, но в сочетании с озонотерапией, для проведения которой использовали ультразвуковой низкочастотный оториноларингологический аппарат «Тонзиллор-ММ» (разработчик: НПП «Метромед», г. Омск). При этом через направляющую фторопластиковую втулку в область преддверья носа вводили волновод-инструмент «ВИ16» и после включения блока управления осуществляли низкочастотную ультразвуковую санацию слизистой оболочки носа путём напыления струйно-аэрозольным факелом (пять напылений по 10 с для каждой половины носа, ежедневно в течение 10 дней) озонированной 10%-ной масляной эмульсии [14].

Производство озона осуществлялось при помощи синтезатора «А-с-ГОКСф-5-05ОЗОН» (сертификат соответствия № РОССRU.001.11ИМ25. Соответствует требованиям нормативных документов ГОСТ Р 50444-92 (Рр-3.4), ГОСТ Р 0267.0267.0-92, ГОСТ Р 50267.0.2005), в котором озон получают действием тихого электрического разряда на кислород (изготовитель ОАО «Электромашиностроительный завод «ЛЕПСЕ», г. Киров). Оливковое масло для приготовления 10%-ной масляной эмульсии озонировали при концентрации озона на выходе из синтезатора 20 мг/мл, время барботирования 100 мл оливкового масла составляло 15 мин.

Первый курс комплексной общепринятой терапии и первый курс комплексного лечения, включающего озонотерапию, проводили пациентам соответствующих групп с 1–2-го дня наблюдения, второй курс комплексной общепринятой терапии и второй курс комплексного лечения в сочетании с озонотерапией – через три месяца от начала наблюдения. При проведении сеансов озонотерапии осложнений и побочных реакций у пациентов не возникало. Катамнестическое наблюдение больных аллергическим ринитом осуществляли в течение года.

Для оценки состояния иммунитета у 100 больных персистирующим ринитом среднетяжелого течения в первые 1–2 дня наблюдения (период обострения заболевания) и через 17–20 дней от начала наблюдения и лечения (период клинической ремиссии) определяли содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов (CD3-л, CD4-л, CD8-л, HLA-DR+-л, CD16-л, CD20-л) в крови, вычисляли иммунорегуляторный индекс (ИРИ) CD4/CD8, исследовали содержание иммуноглобулинов G, A, M, E и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови, показатели фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН), фагоцитарного индекса (ФИ) и теста восстановления нитросинего тетразолия в цитоплазме нейтрофилов (НСТ-тест), паттерн-распознающие рецепторы – толл-подобные рецепторы (Toll-like receptor) TLR2 и TLR6. Контрольную группу в этих исследования составили 83 практически здоровых детей аналогичного возраста, проживающих в г. Кирове и Кировской области.

Для определения содержания CD3-, CD4-, CD8-, HLA-DR+-, CD16- и CD20-лимфоцитов в крови больных аллергическим ринитом использовали реакцию непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), где иммунофенотипирование проводилось с помощью наборов моноклональных антител ЛТ3, ЛТ4, ЛТ8, МКА HLA-DR, ЛТ16 и ЛТ20, изготовленных Нижегородским ООО НПК «Препарат». Результаты исследований выражали в процентах и абсолютных числах. Иммунорегуляторный индекс CD4/CD8 представлял собой отношение процентного содержания CD4- и CD8-лимфоцитов в крови.

Содержание иммуноглобулинов классов G, A, M, E в сыворотке крови больных аллергическим ринитом определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с инструкцией к набору реагентов «Иммуноскрин-G,A,M,E ИФА-Бест» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск); результаты исследования иммуноглобулинов G, A, M в сыворотке крови выражали в г/л, а результаты исследования содержания иммуноглобулина Е в сыворотке крови – в МЕ/мл. Содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови больных аллергическим ринитом определяли методом преципитации в растворе полиэтиленгликоля [15]; результаты выражали в ед.опт.пл.

Фагоцитарную активность нейтрофилов у больных аллергическим ринитом оценивали, используя в качестве фагоцитируемого объекта частицы латекса размером 1,1 мкм (Sigma, США), по методу С.Г. Потаповой с соавт. [16]; результаты выражали в процентах. Фагоцитарный индекс рассчитывали как среднее количество частиц латекса, поглощённое одним нейтрофилом. Спонтанный НСТ-тест оценивали у больных аллергическим ринитом, подсчитывая количество клеток, образующих гранулы нерастворимого диформазана [17]; результаты выражали в процентах.

Исследование толл-подобных рецепторов-2 и толл-подобных рецепторов-6 у больных аллергическим ринитом проводили на проточном цитофлоуриметре Epics XI (Beckman Coulter Inc., США). При этом оценивали показатели экспрессии маркеров CD282 и CD286, изготовленных в ЗАО «Био-Хим-Мак Диагностика» (г. Москва), на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах; результаты выражали в пл. усл. ед.

Результаты, полученные при исследовании клинических и иммунологических параметров у больных аллергическим ринитом, обрабатывали методом вариационной статистики; для оценки влияния фактора озонотерапии на отдельные клинические показатели применяли метод однофакторного дисперсионного анализа [18]. Обработку цифрового материала осуществляли в персональном компьютере в приложении Microsoft Office Excel Mac 2011. Результаты специальных исследований в группах больных аллергическим ринитом сравнивали между собой и с результатами этих исследований у практически здоровых детей.

Результаты и их обсуждение

Главными задачами комплексного лечения наблюдаемых детей со среднетяжёлым персистирующим аллергическим ринитом являлось устранение обострения аллергического воспаления слизистой оболочки носа и других проявлений заболевания, снижение готовности организма к возникновению аллергической реакции и увеличение продолжительности клинической ремиссии.

Наблюдения показали, что комплексная общепринятая терапия и комплексное лечение в сочетании с озонотерапией, проводимые в соответствующих группах больных среднетяжёлым персистирующим аллергическим ринитом, способствовали улучшению самочувствия и аппетита, нормализации сна, уменьшению, а затем исчезновению охриплости голоса и спастического кашля, нормализации носового дыхания, прекращению зуда в носу и чихания, прекращению слизистых или водянистых выделений из носа, нормализации риноскопической картины (табл. 1).

Наступление полной клинической ремиссии в первой группе больных персистирующим аллергическим ринитом, получавших комплексную общепринятую терапию, констатировалось спустя 16,8 ± 0,4 сут от начала лечения, а во второй – спустя 13,1 ± 0,5 сут от начала лечения. Таким образом, во второй группе больных персистирующим аллергическим ринитом, получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапией, наступление клинической ремиссии регистрировалось в среднем на 3,7 сут раньше, нежели в первой группе (p < 0,001).

Результаты, полученные при исследовании параметров иммунологической реактивности, в первой и второй группах больных представлены в табл. 2 и 3.

Как следует из материала, приведенного в табл. 2, в первой и во второй группах больных персистирующим аллергическим ринитом в периоде обострения заболевания отмечалось увеличение относительного и абсолютного количества CD3-лимфоцитов (p < 0,001; p < 0,001; p < 0,001; p < 0,001), уменьшение относительного количества CD4-лимфоцитов (p < 0,001; p < 0,001), увеличение относительного и абсолютного количества CD8-лимфоцитов (p < 0,001; p < 0,001; p < 0,001; p < 0,001), уменьшение иммунорегуляторного индекса (p < 0,01; p < 0,001), уменьшение относительного количества HLA-DR+-лимфоцитов (p < 0,001; p < 0,01), уменьшение относительного количества CD16-лимфоцитов (p < 0,001; p < 0,001) при увеличении абсолютного количества этих клеток (p < 0,001; p < 0,001), увеличение относительного и абсолютного количества CD20-лимфоцитов (p < 0,05; p < 0,05; p < 0,001; p < 0,001) в крови. При этом статистически достоверной разницы между относительным и абсолютным количеством популяций и субпопуляций лимфоцитов в крови в первой и второй группах в периоде обострения заболевания не обнаруживалось.

 

Таблица 1

Сроки ликвидации основных клинических симптомов в первой группе больных ПАР, получавших комплексную общепринятую терапию, и во второй группе больных ПАР, получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапией (М ± m)

Клинический симптом	Сроки ликвидации основных клинических симптомов, сут
	1-я группа больных ПАР, n = 47	2-я группа больных ПАР, n = 53
Нормализация самочувствия и аппетита	6,7 ± 0,2	4,4 ± 0,1*
Нормализация сна	5,6 ± 0,2	4,0 ± 0,2*
Исчезновение охриплости голоса и спастического кашля	6,9 ± 0,1	5,2 ± 0,2*
Нормализация носового дыхания	6,4 ± 0,3	5,0 ± 0,1*
Исчезновение зуда в носу	5,5 ± 0,2	4,3 ± 0,2*
Прекращение чихания	5,0 ± 0,2	4,3 ± 0,1*
Прекращение слизистых или водянистых выделений из носа	8,3 ± 0,3	7,0 ± 0,1*
Нормализация риноскопической картины	14,3 ± 0,4	11,4 ± 0,3*

Примечание: * – p < 0,001 по сравнению с показателями в группе больных аллергическим ринитом, получавших комплексную общепринятую терапию.

 

Таблица 2

Популяции и субпопуляции лимфоцитов в крови в первой группе больных ПАР, получавших комплексную общепринятую терапию, и во второй группе больных ПАР, получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапии (М ± m)

Показатель	Здоровые дети, n = 83	Период обострения заболевания		Период клинической ремиссии
		1-я группа, n = 47	2-я группа, n = 53	1-я группа, n = 47	2-я группа, n = 53
CD3-л, % CD3-л,109/л CD4-л, % CD4-л,109/л CD8-л, % CD8-л,109./л ИРИ CD4/CD8 HLA-DR+-л, % HLA-DR+-л,109/л CD16-л, % CD16-л,109/л CD20-л, % CD20-л,109/л	64,10 ± 1,25  1,04 ± 0,07  49,80 ± 0,80  0,73 ± 0,03  25,50 ± 0,50  0,36 ± 0,01  2,10 ± 0,06  19,50 ± 1,06  0,33 ± 0,02  18,20 ± 1,95  0,37 ± 0,05  9,30 ± 0,77  0,17 ± 0,02	72,47 ± 1,38*  1,97 ± 0,16*  41,63 ± 1,87*  0,90 ± 0,10  31,83 ± 1,70*  0,60 ± 0,05*  1,50 ± 0,18*  13,40 ± 1,69  0,42 ± 0,02  12,67 ± 1,18*  0,63 ± 0,06*  11,73 ± 0,91*  0,34 ± 0,03*	79,20 ± 1,80*  1,98 ± 0,18*  41,82 ± 1,90*  0,93 ± 0,12  32,72 ± 1,65*  0,58 ± 0,04*  1,53 ± 0,16*  13,87 ± 1,70*  0,38 ± 0,04  12,70 ± 1,09*  0,66 ± 0,05*  11,57 ± 0,73*  0,28 ± 0,03*	68,83 ± 1,41*  1,73 ± 0,12*  43,70 ± 1,94*  0,81 ± 0,08  28,76 ± 1,30*  0,45 ± 0,04*  1,82 ± 0,24  15,73 ± 1,34*  0,39 ± 0,04  17,10 ± 1,81  0,39 ± 0,05  12,10 ± 0,76*  0,33 ± 0,03*	65,10 ± 1,02  1,45 ± 0,12*  48,27 ± 1,05  0,62 ± 0,06  25,13 ± 0,68  0,32 ± 0,03  1,95 ± 0,19  18,50 ± 1,25  0,34 ± 0,05  16,90 ± 1,18  0,37 ± 0,04  9,73 ± 0,64  0,22 ± 0,03

Примечание: * – p < 0,05–0,001 по сравнению с показателями у практически здоровых детей.

 

В периоде клинической ремиссии в первой и во второй группах регистрировались неоднозначные изменения содержания лимфоцитарных клеток в крови. Так, в первой группе (см. табл. 2) в периоде клинической ремиссии имело место увеличение относительного и абсолютного количества CD3-лимфоцитов (p < 0,02; p < 0,001), уменьшение относительного количества CD4-лимфоцитов (p < 0,01), увеличение относительного и абсолютного количества CD8-лимфоцитов (p < 0,02; p < 0,05), уменьшение относительного количества HLA-DR+ – лимфоцитов (p < 0,001), увеличение относительного и абсолютного количества CD20-лимфоцитов (p < 0,05; p < 0,001) в крови. Во второй группе (см. табл. 2) в периоде клинической ремиссии регистрировалось только увеличение абсолютного количества CD3-лимфоцитов (p < 0,001) при отсутствии достоверных изменения содержания других лимфоцитарных клеток в крови.

В обеих группах больных персистирующим аллергическим ринитом в периоде обострения заболевания (см. табл. 3) констатировались одинаковые по характеру сдвиги содержания сывороточных иммуноглобулинов, которые проявлялись в повышении содержания иммуноглобулинов G (p < 0,001; p < 0,001) и М (p < 0,001; p < 0,001), резко выраженном повышении содержания иммуноглобулина Е (p < 0,001; p < 0,001) при отсутствии существенных изменений содержания иммуноглобулина А и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови. В периоде клинической ремиссии в первой группе больных аллергическим ринитом, получавших комплексную общепринятую терапию (см. табл. 3), регистрировалось высокое содержание иммуноглобулинов G (p < 0,001), M (p < 0,001) и Е (p < 0,001) при отсутствии достоверных изменений содержания иммуноглобулина А и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови. Во второй группе больных аллергическим ринитом, получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапией (см. табл. 3), в периоде клинической ремиссии отмечалось только повышение содержания иммуноглобулина Е (p < 0,001), тогда как содержание других иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов не отличалось от содержания их в сыворотке крови у практически здоровых детей.

 

Таблица 3

Содержание иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови, показатели фагоцитоза в первой группе больных ПАР, получавших комплексную общепринятую терапию, и во второй группе больных ПАР, получавших комплексное лечение сочетании с озонотерапией (М ± m)

Показатель	Здоровые дети, n = 83	Период обострения заболевания		Период клинической ремиссии
		1-я группа, n = 47	2-я группа, n = 53	1-я группа, n = 47	2-я группа, n = 53
IgG,г/л IgA,г/л IgM,г/л IgE,ME/мл ЦИК, ед. опт. пл. ФАН, % ФИ НСТ-тест, %	8,90 ± 0,14  0,86 ± 0,03  1,10 ± 0,04  91,00 ± 26,20  0,070 ± 0,004  66,70 ± 1,11  10,80 ± 0,17  17,70 ± 0,69	11,15 ± 0,38*  1,03 ± 0,14  1,72 ± 0,09*  535,80 ± 40,04*  0,067 ± 0,002  76,50 ± 1,99*  8,62 ± 0,97*  12,57 ± 1,10*	11,22 ± 0,40*  1,01 ± 0,12  1,69 ± 0,10*  524,80 ± 41,91*  0,069 ± 0,003  76,27 ± 2,22*  8,79 ± 0,93*  12,87 ± 0,93*	10,24 ± 0,20*  0,99 ± 0,14  1,44 ± 0,07*  492,30 ± 51,71*  0,075 ± 0,005  73,37 ± 1,81*  9,39 ± 0,50*  15,53 ± 0,82*	9,07 ± 0,15  1,12 ± 0,24  1,26 ± 0,08  281,50 ± 32,16*  0,070 ± 0,003  68,80 ± 2,15  10,64 ± 0,14  17,73 ± 0,78

Примечание: * – p < 0,05–0,001 по сравнению с показателями у практически здоровых детей.

 

В первой и во второй группах в период обострения заболевания (см. табл. 3) констатировалось повышение фагоцитарной активности нейтрофилов (p < 0,01; p < 0,001) при понижении значений фагоцитарного индекса (p < 0,05; p < 0,05) и НСТ-теста (p < 0,001; p < 0,001). В периоде клинической ремиссии в первой группе сохранялось повышение фагоцитарной активности нейтрофилов (p < 0,01) при снижении значений фагоцитарного индекса (p < 0,01) и НСТ-теста (p < 0,05), тогда как во второй группе фагоцитарная активность нейтрофилов, значения фагоцитарного индекса и НСТ-теста существенно не отличались от показателей фагоцитоза у практически здоровых детей.

В обеих группах в периоде обострения заболевания достоверных изменений экспрессии толл-подобных рецепторов-2 и толл-подобных рецепторов-6 на лейкоцитарных клетках не выявлено. В периоде клинической ремиссии в первой группе регистрировалось повышение плотности экспрессии толл-подобных рецепторов-2 на лимфоцитах (p < 0,001), повышение плотности экспрессии толл-подобных рецепторов-6 на моноцитах (p < 0,05) и нейтрофилах (p < 0,05), повышение относительного количества нейтрофилов (p < 0,001), экспрессирующих толл-подобные рецепторы-6. Во второй группе в периоде клинической ремиссии выявлялось повышение плотности экспрессии толл-подобных рецепторов-2 на лимфоцитах (p < 0,001), повышение плотности экспрессии толл-подобных рецепторов-6 на моноцитах (p < 0,02) и нейтрофилах (p < 0,001), повышение относительного количества моноцитов (p < 0,001) и нейтрофилов (p < 0,001), экспрессирующих толл-подобные рецепторы-2, и повышение относительного количества нейтрофилов (p < 0,01), экспрессирующих толл-подобные рецепторы-6.

В первой группе детей со среднетяжёлым персистирующим аллергическим ринитом, получавших комплексную общепринятую терапию, спустя 3,9 ± 0,3 месяца от начала клинической ремиссии вновь появлялись признаки обострения заболевания. Во второй группе детей со среднетяжёлым персистирующим аллергическим ринитом, которым наряду с комплексным общепринятым лечением были проведены два курса озонотерапии с интервалом между ними в три месяца, клинические признаки обострения заболевания не отмечались в течение 9,3 ± 0,2 месяца. Таким образом, продолжительность клинической ремиссии во второй группе больных аллергическим ринитом превышала в 2,4 раза (p < 0,001) таковую в первой группе. Обработка цифрового материала методом однофакторного дисперсионного анализа позволила установить, что доля влияния фактора озонотерапии на продолжительность клинической ремиссии во второй группе составляет 70,2 % (p < 0,01).

Выводы

Представленные выше результаты собственных исследований свидетельствуют, что включение озонотерапии в комплексное лечение детей дошкольного и младшего школьного возраста, страдающих среднетяжёлым персистирующим аллергическим ринитом, обеспечивало более быстрое наступление полной клинической ремиссии.

В периоде клинической ремиссии во второй группе больных аллергическим ринитом, получавших комплексное лечение в сочетании с озонотерапией, в отличие от больных второй группы, получавших только комплексную общепринятую терапию, регистрировалась нормализация большинства параметров иммунологической реактивности, а также более выраженное повышение функциональной активности толл-подобных рецепторов-2 и толл-подобных рецепторов-6, что является признаком высокой неспецифической противомикробной резистентности.

Проведение повторного курса комплексного лечения в сочетании с озонотерапией (через три месяца после первого курса) второй группе больных аллергическим ринитом обеспечивало сохранение полной клинической ремиссии, продолжительность которой превышала в 2,4 раза её продолжительность в первой группе больных аллергическим ринитом.

Полученные данные указывают на высокие клинический, иммуномодулирующий и противорецидивный эффекты озонотерапии, что позволяет рекомендовать широкое использование её в комплексе лечебных мероприятий при персистирующем аллергическом рините у детей.

About the authors

Yan Yurievich Illek

Kirov State Medical University, Russian Federation

Email: yanillek@gmail.com

MD, PhD, Professor, Head of Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Irina Gennadievna Suetina

Kirov State Medical University

Email: vitasphere@mail.ru

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Galina Vladimirovna Solovieva

Kirov State Medical University

Email: vitasphere@mail.ru

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Elena Yurievna Tarasova

Kirov State Medical University

Email: vitasphere@mail.ru

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Natalia Vladimirovna Khlebnikova

Kirov State Medical University

Email: vitasphere@mail.ru

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Igor Yurievich Mishchenko

Kirov State Medical University

Email: vitasphere@mail.ru

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Larisa Leonidovna Ryseva

Kirov State Medical University

Email: vitasphere@mail.ru

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Nina Pavlovna Leushina

Kirov State Medical University

Email: vitasphere@mail.ru

andidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

Marina Leonidovna Vyaznikova

Kirov State Medical University

Author for correspondence.
Email: vitasphere@mail.ru

Candidate of Medical Sciences, Associate Professor, Department of Pediatrics

Russian Federation, Kirov

References

Supplementary files